Multiple miyelom hücrelerinde lentiviral yöntemle DEK geni ifadesinin susturulması

Abstract

Multiple Miyelom (MM), plazma hücrelerinin klonal olarak anormalçoğalmasıyla oluşan, 6. kromozomun 6p22.3 bölgesinin amplifikasyonunu da içerençok sayıda kromozomal anomalinin görüldüğü bir kanser türüdür. 6p22.3 bölgesindeyerleşim gösteren DEK onkogeni, bu kromozom bölgesinin amplifikasyonusonucunda bazı solid kanser türlerinde aşırı miktarda ifade edilmektedir. Daha öncekiçalışmalarımızda, analiz ettiğimiz MM hastalarının CD138pozitif MM hücrelerindeDEK ifadesinin 2-30 kat arasında azaldığı tespit edildi [Çakar T., 2014]. İlave olarak,analiz edilen MM hastalarının yaklaşık %10'unda DEK geninin amplifiye olmasınakarşın DEK ifadesinin bu amplifikasyondan etkilenmediği ve bu hastalarda da DEKifadesinin azaldığı belirlendi [Çakar T., 2014]. Bu tez çalışmasında, DEK geniifadesinin lentiviral yöntemle kalıcı olarak baskılanmasının U266 MM hücre hattınınmorfolojisine, canlılığına, çoğalmasına ve kemoterapi ilacı Melphalan'a olanhassasiyetine etkileri analiz edildi.Elde edilen sonuçlar, iki farklı lentiviral shRNA ile DEK ifadesi baskılananhücrelerde, kontrol grubu hücrelerine göre bölünme süresinin yavaşladığını vekontrol hücreleri (sh-negatif) bölünmelerini 43 saatte tamamlarken, bu süreninshDEK-B hücrelerinde 45 saate, shDEK-C hücrelerindeyse 51 saate uzadığınıgösterdi. Sadece shDEK-C hücrelerinde gözlenen bölünme süresindeki bu uzamanınistatistiksel olarak anlamlı olduğu belirlendi (P0.05). Giemsa ile boyanmışhücrelerin ışık mikroskobu analizleri hücrelerin benzer morfolojiye sahip olduklarınıgösterdi. Kontrol hücreleri ve DEK ifadesi baskılanmış hücrelerde, MM hastalarınıntedavisinde kullanılan Melphalan'a hassasiyetin değişmediği ve hücrelerinMelphalan varlığında çoğalmalarını durdurdukları tespit edildi. Bu verilerdoğrultusunda, DEK ifadesinin U266 MM hücre hattında baskılanmasının, zatenyavaş olan hücre bölünme süresini biraz daha yavaşlattığı ancak hücre morfolojisi veMelphalan hassasiyetini etkilemediği sonucuna varıldı. Bu tez çalışması Tübitaktarafından KBAG 212T108 no'lu 1001 projesi ile desteklenmiştir.

Multiple myeloma (MM) is characterized by abnormal expansion of malignantplasma cells, representing several chromosomal abnormalities including theamplification of 6p22.3 chromosome region. DEK oncogene, located onchromosome 6p22.3, is overexpressed in several solid tumors due to amplification ofchromosome 6 or 6p region. We previously showed that DEK expression isdownregulated by 2-30 fold in CD138positive MM cells in our cohort of MM patients,without being affected by the amplification of DEK gene, which is observed in about10 % of our cohort [Çakar T., 2014].In this thesis, we aimed to analyze the affect of DEK knock-down on thebiology of U266 MM cell line. Silencing of DEK expression by two differentlentiviral sh-RNA contracts (shDEK-B and shDEK-C) resulted in about 2 hours(shDEK-B) to 8 hours (shDEK-C) increase in the doubling time, the later increasewas statistically significant (P0.05). Light microscopy analysis of Giemsa stainedcells did not show any difference in morpghology of shDEK-B or shDEK-C cellscompared with control sh-Negative cells. Melphalan treatment resulted in a similarresponse in the control and sh-DEK cells and induced growth arrest in all treatedcells. In summary, our results suggest that the down regulation of DEK expression inU266 MM cells slightly increase the dobling time of the cells whereas it does notaffect their morphology and Melphalan response. This work was supported by theScientific and Technological Research Council of Turkey (TÜBİTAK) 1001 Grant(KBAG 212T108).