SIP1`in karaciğer kanser hücrelerinde resveratrol yanıtına etkisi

Abstract

Hepatosellüler karsinoma (HCC), dünyada en çok görülen kanser türleri arasında 3. sırada yer alır. Hepatosellüler karsinomayla ilişkili etiyolojik faktörler siroz, Hepatit B ve C virüslerine bağlı hepatitler, aşırı alkol kullanımı, alkolik olmayan karaciğer yağlanması ve hemakromatozistir. Epitel Mezenkim Geçişi (EMT) embryonik bir program olup kanser metastazında da etkinleşmektedir. EMT epitel bir hücrenin apiko-bazal hücre polaritesi, hücre-hücre bağlantılarını kaybetmesi, ön-arka polaritesi, artan hücre hareketi ve invazyon yeteneği gibi mezenkimal özelliklerin kazanılması ile karakterizedir. E-kaderinlerin baskılandığı EMT programının indükleyicilerinden SIP1/ZEB2 transkripsiyon faktörü doğrudan E-kaderin promotorundaki E-box dizisine bağlanarak E-kaderin gen ifadesini inhibe eder. SIP1 aynı zamanda hücre proliferasyonu, kök hücre fenotipi ve hücre yaşlanması ile de ilişkilendirilmiştir. Bu çalışmada karaciğer kanseri hücre hattı SNU398'de SIP1 ifadesi susturulmuş (Lot2) ve normal (NSC) kalımlı hücre klonları geliştirildi. SIP1'in resveratrol uygulanan hücre klonlarında hücre proliferasyonu, apoptoz ve hücre döngüsüne olan etkileri araştırıldı. 0, 50, 100, 150 ve 200 µM konsantrasyonlarda resveratrol uygulanan hücreler uygulamadan 24 ve 48. saat sonra analiz edildi. Resveratrol uygulanması sonucunda Lot2 ve NSC hücre gruplarında birbirlerine göre hücre proliferasyonunda anlamlı bir değişim gözlenmedi. Ancak her iki hücre grubunda da 150 µM kansantrasyonda resveratrol uygulandığında hücre proliferasyonunda anlamlı bir azalma görüldü. Apoptoz ve hücre döngüsü analizleri 150 µM resveratrol konsantrasyonunda yapıldı. 24 saat sonrasında Lot2 ve NSC hücre gruplarında resveratrolün etkisi benzer şekilde görülmekteyken, 48 saat resveratrol uygulanması sonucunda NSC hücre grubunda erken-apoptotik hücrelerde (7AAD-/Annexin V+) bir artış tespit edildi. 150 µM resveratrol uygulandıktan 24 saat sonra hem Lot2 hem de NSC hücre gruplarında G1 fazında tutulma ve 48 saat sonra da G2/S fazında tutulma gözlendi.

Hepatocellular carcinoma (HCC) is the third most common cancer worldwide. Main etiologic factors associated to hepatocellular carcinoma include cirrhosis, chronic hepatitis resulting from Hepatitis B and C viruses, excessive alcohol consumption, non-alcoholic fatty liver disease and hemochromatosis. Epithelial Mesenchymal Transition (EMT) is an embryonic program that is also activated in cancer metastasis. EMT is characterized by the loss epithelial apico-basal cell polarity and cell-cell connections, gaining mesenchymal cell characteristics such as front-back polarty, increased cell movement and invasion ability. SIP1/ZEB2 transcription factor is one of the inducers of EMT program and supresses E-cadherin expression by binding to E-box in the promoter region of E-cadherin. Also, SIP1 is associated to other pathophysiological processes including cell proliferation, stem cell phenotype and cellular senescence. In this study, stable knock-down (Lot2) and control cell clones (NSC) of HCC cell line SNU398 were generated. The effects of SIP1 on cell proliferation, apoptosis and cell cycle were investigated in cell clones treated with resveratrol. Resveratrol was applied at 0, 50, 100, 150 and 200 µM concentrations and cells were analyzed at 24 and 48 hours after treatment. There was not any significant change in cellular proliferation when resveratrol treated Lot2 and NSC groups were compared. But, a significant inhibition of cellular proliferation was detected at 150 µM resveratrol treatment in each group. Apoptosis and cell cycle analyses were carried out at 150 μM concentration of resveratrol. The effects of resveratrol on Lot2 and NSC groups were similar after 24 hours of drug treatment, but at 48 hours after treatment an increase in the number of early-apoptotic cells (7AAD-/Annexin V+) was detected in NSC group. After treatment with 150 µM resveratrol G1 arrest at 24 hours and G2/S arrest at 48 hours were observed in both Lot2 and NSC cell groups.