Prenatal diagnosis and improvement of the carrier identification in duchenne muscular dystrophy families

Abstract

VI ÖZET Duchenne musküler distrofi (DMD), 3300 erkekte bir görülen, X kromozomuna bağlı, resesif karakterde kalıtılan, ölümcül bir nöromüsküler hastalıktır. Becker musküler distrofi, DMD'nin daha az sıklıkta görülen ve seyri daha yavaş olan allelik formudur. DMD'ye neden olan mutasyonların yüzde 50-70'ini delesyonlar, yüzde altısını duplikasyonlar ve yüzde 30-35'ini nokta mutasyonları, mikro delesyon ve benzeri mutasyonlar oluşturur. Tedavisi bulunmayan hastalığın önlenmesinde, taşıyıcıların belirlenmesi ve doğum öncesi tanı, büyük önem taşımaktadır. Türk DMD/BMD ailelerinde uygun bir doğum öncesi tanı stratejisi saptamak amacı ile, hastalığa neden olan delesyonlar, çoklu gen amplifikasyon sistemleri kullanılarak tarandı ve olguların yüzde 51.3'ünde delesyon görüldü. Polimeraz Zincir Reaksiyonu (Polymerase Chain Reaction; PCR) tekniği kullanılarak saptanabilen PERT 87.15/Xmn I, PERT 87.8/Taq I, PERT 87.15/Bam HI, I 24/Pst I, I 38/Taq I ve PERT 87.1/Bst Nl polimorfizmlerinin görülme sıklıkları, sırası ile, 0.43, 0.41, 0.33, 0.33, 0.48 ve 0.47 olarak belirlendi. Çoklu gen amplifikasyon sistemleri ve/veya PCR ile tanımlanabilen, yukarıda adı gecen polimorfik markörler kullanılarak, 13 Türk ailesinde, istek üzerine doğum öncesi tanı verilebildi. Bu çalışma kapsamında DMD/BMD ailelerinde delesyon taşıyıcılarının belirlenmesi amacı ile, radyoaktivite içermeyen yeni bir kantitatif PCR analiz yöntemi geliştirdi ve uygulanabilirliği gösterildi.

ABSTRACT Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is an X-linked neuromuscular disorder, affecting one in every 3300 male births. Becker Muscular Dystrophy (BMD) is the less frequent, allelic form of DMD, with a more benign course. Mutations, causing DMD/BMD are deletions in 50-70 per cent, duplications in six per cent and point mutations, microdeletions/insertions in the 30-35 per cent of all cases. Since there is no cure or effective treatment, prenatal diagnosis and carrier detection play an important role in the prevention of the disease. With the aim of establishing a convenient prenatal diagnosis strategy, multiplex gene amplification systems were used to detect deletions in Turkish DMD/BMD families and revealed deletions in 51.3 per cent of the cases. Expected heterozygote frequencies for polymorphic markers, namely PERT 87.15/Xmn I, PERT 87.8/Taq I, PERT 87.15/Bam HI, I 24/Pst I, I 38/Taq I and PERT 87.1/Bst Nl, were calculated to be 0.43, 0.41, 0.33, 0.33, 0.48 and 0.47, respectively. In this study, prenatal diagnosis could be offered in 13 Turkish DMD/BMD families upon request either by multiplex gene amplification and/or by Polymerase Chain Reaction (PCR)-based Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis using these polymorphic markers. A novel, nonradioactive quantitative PCR technique has been developed within the framework of this thesis to detect deletion carriers in DMD/BMD families. Carrier status of all females tested using this method could be correctly determined.