Proteazom inhibitörlerinin H295R hücre hattındaki endoplazmik retikulum stres ve apoptoz üzerindeki etkisi

Abstract

Adrenokortikal karsinom (ACC), tam rezeksiyondan sonra bile sıklıkla tekrarlayan ve yüksek metastatik yayılma riski olan malign bir hastalıktır. İleri evrelerde genel sağkalım zayıftır ve terapötik seçenekler sınırlıdır. Proteazom inhibitörlerinin çeşitli kanser türlerindeki etkinliği litaratürde birçok çalışmayla ortaya konmuştur. Bu çalışmada, 2OS proteazomun β5 ve daha az bir ölçüde β1 ve β2 katalitik bölgesine bağlanarak inhibe eden Bortezomib ve Ixazomib ile, seçici olarak immunoproteazomun β5i altünitesine bağlanarak inhibe eden ONX 0914' ün H295R hücre hattında ER stres ve apoptoz üzerindeki etkileri araştırılmıştır. H295R hücrelerine 48 saat süre ile 70 nM Bortezomib, 140 nM Ixazomib ve 2.5 µM ONX 0914 uygulanarak kontrole göre stres proteinlerinin varlığı GRP78 / P-PERK / ATF4 / CHOP yolağı üzerinden Western blot yöntemiyle tayin edilmiş olup hedef protein varlığının intihibitörlü gruplarda kontrole kıyasla anlamlı derecede artış gösterdiği tespit edilmiştir. Yapılan akım sitometrisi analizinde 48 saat IC50 dozu verilen inhibitörlü gruplarda kontrole kıyasla apoptozun anlamlı derecede artış gösterdiği tespit edilmiştir. Bu bulgular, proteazomun farklı alt birimlerinin farklı inhibitörler tarafından inhibe edildiği taktirde H295R hücre hattında ER stres ve apoptoz üzerinde etkin olduğunu ve immunoproteazom inhibisyonunun da bu hastalıkta yeni bir terapötik hedef olabileceğini ortaya koymaktadır.

Adrenocortical carcinoma (ACC) is a malignant disease that frequently recurs even after complete resection and has a high risk of metastatic spread. In advanced stages, overall survival is poor and therapeutic options are limited. The effectiveness of proteasome inhibitors in various types of cancer has been demonstrated by many studies in the literature. In this study, the effects of Bortezomib and Ixazomib, which inhibit by binding to the β5 and a lesser extent β1 and β2 catalytic region of the 2OS proteasome, and ONX 0914, which selectively binds to the β5i subunit of the immunoproteasome, on ER stress and apoptosis in the H295R cell line were investigated. The presence of stress proteins was determined by Western Blot method via GRP78 / P-PERK / ATF4 / CHOP pathway by applying 70 nM Bortezomib, 140 nM Ixazomib, and 2.5 µM ONX 0914 to H295R cells for 48 h was found to be significantly increased compared to the flow cytometry analysis, it was determined that apoptosis increased significantly in the groups with inhibitor which is given IC50 dose for 48 h compared to the control. These findings reveal that if different subunits of the proteasome are inhibited by different inhibitors, they are effective on ER stress and apoptosis in the H295R cell line, and immunoproteasome inhibition may be a new therapeutic target in this disease.