N-nitrozopirolidin`in in piruvat kinaz, glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, sitrat sentaz enzimlerine in vitro etkisi ve bağlanma özellikleri

Abstract

58 VI. ÖZET Bu çalışmada N-Nitrozopirolidin' in Maya Glukoz 6 Fosfat Dehidrogenaz, Tavşan Kası Piruvat Kinaz, Domuz Kalbi Sitrat Sentaz enzimlerine in vitro etkisinin, bağ lanma özelliklerinin ve metabolizmasının incelenmesi amaçlanmıştır. Deneylerde enzim aktivitesi tayini için kinetik yöntemler, bağlanma çalışmaları için Diyaliz ve Poliak- rilamid Jel Elektroforezi, metabolizma çalışması için ise Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatograf isi tekniği kulla nıldı. T-5Q (%50 inhibisyon için gerekli inhibitor deri şimi) derişimleri Piruvat Kinaz, Glukoz 6 Fosfat Dehid rogenaz ve Sitrat Sentaz enzimleri için sırasıyla 1,4 mM, 3,8 mM ve 24 mM olarak saptandı. Bu inhibisyon Sı ğır Serum Albumini ve enzimlerin kendi koenzimleri ta rafından engellendiği ve derişimlerinin arttırılmasıy la inhibisyonun daha fazla önlendiği saptandı. N-Nit- rozopirolidinin çalışılan her üç enzimi de nonkompete - tif olarak inhibe ettiği bulundu. Bağlanma çalışmala - larında diyaliz sonucu N-Nitrozopirolidin ' in enzimlere bağlandığı saptandı. Metabolizma çalışmasında sıçan karaciğer mikrozomal f aksiyonunun N-Nitrozopirolidin' i metabolize ettiğini gösteren kanıtlar elde edildi.

59 VII SUMMARY IN VITRO EFFECTS AND BINDING PROPERTIES OF N- NITROSOPYRROLIDINE ON THE PYRUVATE KINASE, GLUCOSE 6 PHOSPHATE DEHYDROGENASE »CITRATE SYNTHASE ENZYMES. The aim of this work is to investigate the in vitro effects and binding properties of N-Nitroso - pyrrolidine to the yeast Glucose 6 Phosphate Dehy - drogenase, rabbit muscle Pyruvate Kinase, pig heart Citrate Synthase and metabolism of N-Nitrosopyrroli- dine. During experiments, Kinetic methods were used to determine enzyme activities, Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Dialysis for binding studies and High Pressure Liquid Chromatography technique was used for studying the metabolism. I50 (inhibitor concentration required for 50% inhibition) concentration for Pyruvate Kinase, Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase, Citrate Synthase enzymes were established to be 1.4 mM, 3.8 Mm and 24 mM respec tively. When Bovine Serum Albumin and coenzymes of enzymes used were added to the incubation medium, the N-Nitrosopyrrolidine inhibition decreased. As a result of an increase in concentration of Bovine Serum Albumin and coenzymes of these enzymes, these enzymes were observed to be protected against inhibition. In addition, it was also observed that N-Nitrosopyrrolidine inhi bits all the enzymes used noncompetitively. In binding studies N-Nitrosopyrrolidine was noted to bind to the enzymes as a result of Dialysis. During work on metabolism it was noted that the rat liver microsomal fraction metabolised N-Nitrosopyrrolidine.