Hansenula polymorpha mayasında metanol oksidaz aktivitesinin karakterizasyonu, metanol oksidazın izolasyonu ve saflaştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada Hansenula polymorpha A16 metilotrofik mayası kullanılarak içerdiği metanol oksidaz (MOX) enzimi konsantrasyonunu bağıl maksimum konsantrasyona ulaştırmak, dolayısıyla MOX aktivitesini artırmak amacıyla uygun koşulların optimizasyon denemeleri yapıldı. Uygun optik yoğunluk (ODeoo) yaklaşık 1-1,5 arasında bulundu. Uygun substrat (Metanol) konsatrasyonu 100-200 pl arasında belirlendi. Uygun inkübasyon zamanı 50 dakika, inkübasyon sıcaklığı 25°C, uygun pH aralığı 6-8 olarak belirlendi. Uygun koşullar belirlendikten sonra bu şartlar altında kültürü yapılarak elde edilen maya ekstratından MOX enzimini saflandırma aşamalarına geçildi. %30-60 aralığında (w/v) amonyum sülfat ile tuz çöktürmesi yapıldı. Sonra tuz fazlasını gidermek için 50 mM fosfat tamponuna karşı 24 saat süreyle dializ yapıldı. SDS-jel elektroforezi ile MOX enzimnin her alt ünitesinin molekül ağırlığı yaklaşık 68000 olarak belirlendi.

1 7 II SUMMARY In this study optimization of the compression the MOX enzyme for methylotrophic yeast Hansenula polymorpha A16 was carried out. It was found that at an ODeoo=1-1,5, 100-200 jxL methanol concentration, 50 minutes incubation time, 25°C incubation temperature and pH=6-8 were the most suitable conditions to active the maximum activity of MOX. After determination of the optimized conditions is the MOX enzyme was purified using 30-60 % amonium sulphate then the protein dialyses against 50 mM phosphate buffer. SDS gel electrophoresis about that each subunit `of MOX enzyme was about 68000 Da.