Kalkan balığı (Psetta maxima) kas dokusundan karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve kinetik özelliklerinin belirlenmesi

Abstract

Bu çalışmada, kalkan balığı (Psetta maxima) kas dokusundan karbonik anhidraz (CA) enzimi saflaştırılmış ve bu enzimin kinetik davranışları ve bazı özellikleri belirlenmiştir. Saflaştırma basamakları; hemolizat hazırlanması ve afinite jel kromatografisi işlemidir. CA enziminin saflaştırılmasında, enziminin spesifik aktivitesi 755.2 EU/mg protein, verim 69.05 ve saflaştırma katsayısı 50.65 olarak belirlenmiştir ve yapılan saflaştırma işlemlerinin hepsi +4°C'de gerçekleşmiştir. SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile saflaştırılan CA enziminin molekül ağırlığı 29.7 kDa olarak belirlenmiştir. Kalkan balığının (Psetta maxima) kas dokusundan saflaştırılan CA enziminin optimum iyonik şiddeti 0.020 M Tris-SO4 tamponu, optimum pH'sı 8.0, stabil pH'sı 8.0 ve optimum sıcaklığı 30°C olarak gözlenmiştir. Enzimin kinetik özellikleri içerisinde yer alan KM değeri 0,344 mM ve Vmax değeri de 0,253 EÜ/ml olarak belirlenmiştir.

In this thesis, purification of carbonic anhydrase from turbot (Psetta maxima) muscle tissue was done and analysis of the kinetic properties of the enzyme are described. The purification steps are hemolysate preparation and affinity gel chromatography. During the purification process, the enzyme was determined to have specific activity of 755,2 EU/mg proteins, yield of 69,05% and purification fold of 50,65. All of the purification steps were performed at +4°C. The molecular weight of the enzyme was calculated to be 29,7 kDa by means of SDS-PAGE. The optimum ionic strenght was 0.02 M Tris-SO4 buffer, both optimum andstable pH was 8.0, and the optimum temperature was 30°C. KM and Vmax values were determined as 0,344 mM and 0,253 EU/ml, respectively.