Miyeloperoksidaz enziminin meme kanseri tedavisinde kullanılan tamoksifene etkisinin incelenmesi

Abstract

?Miyeloperoksidaz-H202-Cl-? sistemi lökositlerde güçlü antibakteriyel ve sitotoksik etkiye sahiptir. Fizyolojik pH'da Cl- iyonlarının Cl+ iyonlarına yükseltgenmesi ile birlikte miyeloperoksidaz bazı tehlikeli reaktif oksijen türlerinin oluşumuna yol açmaktadır. Fizyolojik koşullarda ROS'ların üretilme ile yok edilme mekanizmaları arasındaki denge bozulursa, vücutta hasar oluşabilir. Hücrede ROS birikimi radikal ilgili DNA, protein, lipid hasarı oluşturarak kanser ve nörodejeneratif bozukluklar gibi yaşa bağlı hastalıkların gelişmesinde önemli olur.Bu tez çalışmasında Tamoksifene miyeloperoksidaz -H2O2-Cl- sisteminin etkisi ile oluşan reaksiyon ürünleri incelendi. Bu maksatla alınan insan kan örneklerinin içerdiği lökositler izole edildi. Liziz işlemiyle parçalanan lökositlerden izole edilip saflaştırılan miyeloperoksidazın 37°C'da ve fizyolojik pH'da (pH 7.2-7.3) Tamoksifene etkisi UV-Vis. spektrofotometre ve LC-MS, FT-IR spektrometre sistemleri ile değerlendirildi.Daha önce yapılan çalışmalarda Tamoksifene karaciğer mikrozomlarının etkisi ile metabolitlerin oluşması ve ?Horseradish? peroksidaz katalizi incelenmişti. Yapılan çalışmada ilk defa yeterli miktarda saf halde elde edilen miyeloperoksidazın daha yüksek konsantrasyonda kullanılması, bu enzimin Tamoksifene etkisinde oluşan ürünlerin çok daha belirgin olarak izlenmesini sağladı. Tamoksifenin yapısında bulunan C-O-C eterik bağının, C=C çiftli bağının ve C-N bağının parçalanması sonucu serbest radikallerin oluştuğu kanaatine varıldı.

?Myeloperoxidase-H202-Cl-? system has a potent antibacterial and cytotoxic effect in leucocytes. In physiological pHs, myeloperoxidase leads to the production of hazardous reactive oxygen species together with the oxidation of Cl- to Cl+. Under physiological conditions, if the balance between production and detoxification mechanisms of ROS is imbalanced, then some damages may occur in human body. Accumulation of oxidative damage in a cell causes radical-related damage to DNA, to proteins and to lipids and plays a key role in the development of age-dependent diseases such as cancer and neurodegenerative disorders.In this thesis, reaction products formed by the effect of myeloperoxidase-H202-Cl- system on Tamoxifen, were studied. For this purpose, leucocytes found in human blood samples were isolated succesfully. The effect of the purified myeloperoxidase obtained from leucocytes which was isolated by lysis formerly, on Tamoxifen at 37°C and in physiological pH (pH 7.2-7.3) was evaluated by using UV-Vis. spectrophotometer and LC-MS, FT-IR spectrometer systems.In previous studies, metabolite formation by the effect of liver microsomes on Tamoxifen and Horseradish peroxidase catalysis was examined. In this study, the very first obtained myeloperoxidase at sufficient quantities and its usage at higher concentrations, provided to monitor products distinctly which were formed in consequence of enzyme acting on Tamoxifen. It was decided that free radicals were formed as a result of broken C-O-C etheral bond, C=C double bond and C-N bond found in Tamoxifen structure.