Fare lenfosit doğal sitotoksisitesinin kolorimetrik yöntem ile ölçülmesi

Abstract

39 ÖZET Bu çalışmada, daha önce kendi laboratuvarlanmızda insanda gerçekleştirilen Doğal Antikandidial İndeks yönteminin fare siste minde uygulanması ve standardizasyonu gerçekleştirildi. Deneyler de, kristal viyole ve iyot bileşiği ile boyanan maya hücreleri hedef, fare lenfositleri ise effektör hücre olarak kullanıldı. Effektör hücre lerle mikrotitrasyon plaklarında inkübe edilen maya hücreleri, duvar zedelenmesi sonucu tuttukları boyayı ortama bıraktılar ve kültür sıvısının absorbans değeri, Multi-scan spektrofotometre ile değerlendirildi. Sitotoksik aktivite, Antikandidial Kolorimetrik İn deks olarak gösterildi. Renk yoğunluğu, parçalanan hedef sayısı ile doğru orantılı idi. Bu çalışmada tarif edilen kolorimetrik yöntemin doğal hücre sel sitotoksisite ölçümünde Cr51 salınım deneyi yerine kullanılabi lecek ucuz, güvenilir ve kısa süreli bir yöntem olduğu gösterildi.

40 SUMMARY Measurement of Murine Natural Cell-mediated Cytotoxicity by Colorimetric Assay. In this study Natural Anticandidial Index method which was previously developed in our laboratory has been standardized and examined in the murine system. In the experiments, yeast cells that had been stained with crystal violet and iodine, were used as target and murine spleen lymphocytes as effector cells. The yeast cells were incubated with effectors in microplates and released the dye as a result of cell wall damage. The absorbance value was quantitated using a Multi scan spectrophotometre. The cytotoxicity was assessed as Anticandidial Colorimetric Index (ACCI). The absorbance value was directly proportional to the number of the damaged target cells. In conclusion, the colorimetric assay described in this study, is a reliable, rapid and cost-efficient method that can be used as an alternative to Cr51 -release assay, for measuring natural cell-mediated cytotoxicity.