Osteosarkomlu olgularda p53 ekson 7 mutasyonlarının polimeraz zincir reaksiyonu ile belirlenmesi

Abstract

67 VI. ÖZET Osteosarkomlar malign kemik tümörleri içinde sık görülen, etiyolojisi tam olarak aydınlatılamamış tümörlerdir. Kişide kolla/en ve kemik doku bozukluklarının varlığı, iyonizan radyasyonla karşı karşıya gelme ve virüsler gibi bazı öncül uyaranlara tümörün gelişmesinde rol alabilecekleri ortaya atılmıştır. İnsanda 17. kromozomun kısa kolunda yerleşmiş olan tümör supressör geni p53 de etiyolojik faktörler arasında gösterilmektedir. p53 geninin her iki aletinde kayıp veya mutasyon sonucu, gen ürününün tümör baskılayıcı fonksiyonu bozulmaktadır. Böylece hücrenin G1 den S fazına geçmesi engeli ortadan kalkarak hücre kontrolsüz çoğalmaya yönelmektedir. Bu tez çalışmasında PCR tekniği kullanılarak hem osteosarkomlu 11 taze tümör dokuları ve hem de geriye dönük olarak 19 parafin blok örneklerinde, p53 geninin iki duyarlı bölgesi ekson 7 248 ve 249. kodonları nokta mutasy onları yönünden incelenmiştir. 7. eksonun 248. kodonu Msp I, 249. kodonu ise Hae III enzimi ile analiz edilerek değerlendirilen toplam 30 DNA örneğinin hiçbirisinde ekson 7 248. ve 249. kodon mutasy onları görülmemiştir Osteosarkom olgularında p53 geni ekson 7 mutasy onları %3 civarında bildirilmektedir. İncelenen örneklerde mutasyon oranının az bulunması genin diğer eksonlardaki mutasyonlarının tümörden sorumlu olabileceğini düşündürmektedir. Ayrıca p53 geninde herhangi bir mutasyon oluşmaksızın gendeki özgün CpG metiiasyonlarının bulunması gen ürününü başlayabilmektedir. Daha ileri DNA- dizi analizi yöntemlerinin kullanımı ile ilgili eksonun diğer kodonlarının detaylı incelenmesi mümkün olabilecektir.

62 VII. SUMMARY Osteosarcomas are among malignant tumors of the bone of which etiology is not understood yet. In a sense, they are not rather frequently with. Several hypotheses have been put forward in etioigy and those include abiotrophy of coliageneous and bone tissue, exposure to ionising radiations and viral infections. Recently it has been suggested p53 tumor suppressor gene located on short arm of choromosome 17 is similarly involved in the etio-pathogenesis of osteosarcoma. According to this hyphotesis the loss of both alleles ofp53gene either through mutation or by some other mechanism tumor suppressor effect of this gene is disturbed as a result the blockage of entry to S from G1 phase, the cell starts to replicate without control. In this work, both fresh from 11 patients and sections of paraffin - embedded tissue from 19 patients with osteosarcoma were used in order to reveal point mutationts in two hot spots of exon 7 248 and 249 codons by using polymerase chain reaction (PCR) technique. Codon 248 of the exon 7 was analyzed by the restriction enzyme Msp I and codon 249 of the same exon by Hae III. No point mutation was detected in DNA samples from 30 patients. Since mutations of p53 in this region of chromosome have only been found in about 3% of cases, we suggest some mutations other than in exon 7 is involved. Alternatively it is possible that CpG methylatlon pattern would63 suppress the gene product without any mutation, thus leading the overgrowth. To explain the tumorigenesis in the case of osteosarcoma DNA sequence analysis must be made not only in these codons but also in other codons of this exon 7.