Akut lösemilerde gözlenen kromozom 11q23 trithorax, immunglobulin ağır zincir ve T-hücre reseptörü- genleri yeniden düzenlenmelerinin southern blot yöntemi ile belirlenmesi

Abstract

AL üzerinde son yıllarda yapılan moleküler düzeydeki çalışmalar hem hastalığın tanısında hem de tedavi planlanması ve relapslann erken dönemde saptanmasında yararlı olmaktadır. Bu çalışmalarda IgH, TCRP genleri yeniden düzenlenmeleri ALL tanısında ve tiplendirmesinde yol gösterici olarak kullanılmaktadır. AL olgularının %5'inde gözlenen, kromozom llq23 bölgesini içeren translokasyonlarda kırılma noktalarının insan trithorax (HRX) geninde kümelendiği saptanmış, bu çalışmada AL'lerde gözlenen HRX, Ign ve TCRP genleri yeniden düzenlenmelerinin moleküler bir yöntem olan Southern blot yöntemi ile belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışma kapsamına yaşlan 1 ile 80 arasında değişen 21 AL hastası ve Josk-1 hücre soyu dahil edilmiş, ilk tanıda alınan kan ve kemik iliği örneklerinden elde edilen 10 ug yüksek molekül ağırlıklı genomik DNA EcoRI ve HindlII restriksiyon enzimleri ile kesilmiş, naylon membranlara aktarılmış ve genlere özgü problarla hibridizasyona tabi tutulmuş, otoradyografi işleminden sonra sonuçlar değerlendirilmiştir. AML tanısı alan 4 olguda ve Josk 1 hücre soyunda Ign probu ile germline bantlar gözlenirken 15 B-hücreli ALL ve 1 T-hücreli ALL olgusunda Ign genlerinde yeniden düzenlenmiş bantlar saptanmış, bu bulgular ALL'lerde gözlenen hücre tipinin sınırsızlık özelliğine bağlı olduğu konusundaki raporları desteklemiştir. TCRP probu ile 1 T-hücreli ALL ve 4 B-hücreli ALL olgusunda yeniden düzenlenme gösteren bantlar65- gözlenmiştir. Bu 4 ALL olgusundaki TCRP yeniden düzenlenmeleri de hücre tipinin sınırsızlık özelliği gösteren hücre klonlannın varlığına bağlanmıştır. HRX probu ile, sitogenetik analiz sonuçlarına göre kromozom 1 lq23 bölgesinde translokasyon saptanmış 10 olguda ve inversiyon saptanmış 1 olguda yeniden düzenlenmiş bantlar gözlenmiştir. Sonuç olarak; bu çalışmada sitogenetik ve immunfenotiplendirme yanında Southern blot yönteminin kullanılması AL tiplendirmesinde yaralı olmuş, aynı zamanda hücre tipinin sınırsızlık özelliğini göstermedeki yaran saptanmıştır. HRX geni yeniden düzenlenmelerinin tek prob ile belirlenmesi moleküler biyolojik yöntemlerin lösemi hastalarının tanı ve takibinde yararlı olduklarını öne süren diğer raporları desteklemiştir.

66 VII. SUMMARY In the recent years, molecular studies on acute leukemia have been proved to be useful both in diagnosis and planning therapeutic regimens while allowing detection of relapses at earlier stages. In these studies, rearrangements of Ign and TCRP genes were used as helpful tools in diagnosis and classification of ALL. Translocations involving chromosome band 1 lq23 are seen in 5% of all AL cases and the breakpoints were found to be clustered in one region named the human trithorax (HRX) gene. In this study the aim was to detect rearrangements of HRX, Ign and TCRP genes with a molecular biologic method, Southern blotting. Twenty-one AL patients aged between 1 to 80 and a cell line, Josk 1, were included in this study. lOug high molecular weight genomic DNA, isolated from peripheral blood and bone marrow samples taken at diagnosis, was digested with restriction enzymes EcoRI and HindlH, transferred onto nylon membranes and hybridized with gene specific probes. Results were evaluated after autoradiography. Four AML patients and the Josk 1 cell line showed germline bands after hybridization with the Ign probe, while 15 B-cell and 1 T-cell ALL patients showed rearranged bands. IgH chain rearrangement in the T-cell ALL patient was regarded as lineage infidelity which is observed in some ALL patients. Hybridization with the TCRP67 probe showed rearranged bands in 1 T-cell and 4 B-cell ALL patients which also showed cell clones with lineage infidelity. Ten patients who had translocations and 1 patient who had an insertion involving 1 lq23, showed rearranged bands after hybridization with the HRX probe. As a result, similar to other studies reported in the literature, in this study a molecular biologic method, Southern blotting, when combined with cytogenetic analysis and immunphenotyping, was found to be useful in classification of AL as well as in detecting lineage infidelity in the patients. Another conclusion derived from these results is that detecting HRX rearrangements with a single probe supported the other reports suggesting molecular biological methods as powerful tools in diagnosis and follow-up of therapy in leukemia patients.