İnsan spermindeki adezyon moleküllerinden beta 1 alfa 6 integrin molekülünün sperm sayı ve morfolojisine göre dağılımının immünohistokimyasal olarak değerlendirilmesi

Abstract

-104- vn- ÖZET Beta 1 alfa 6 integrin molekülü spermiyum hücre zarında bulunan glikoprotein yapısında bir adezyon molekülüdür. Bu molekül spermiyumun dölleme yeteneğiyle olan ilişkisi nedeniyle son yıllarda birçok araştırmaya konu olmuştur. Bu çalışmanın amacı, yıkama işlemiyle kapasitasyon kazanmış ve kazanmamış normal ve anormal hasta semen örneklerinde spermiyum hücre zarında bulunan beta 1 alfa 6 integrin molekülünün immunhistokimyasal olarak ortaya konulmasıdır. Bu erekle Başkent Üniversitesi Kadın ve Çocuk Sağlığı Merkezi Yardımcı Üreme Teknikleri Laboratuvarma başvuran hastaların eşlerinden alınan semen örnekleri kullanılmıştır. Semende spermiyum sayısı 40 x 106/ml az ve çok olan hastaların spermiogramlan DSÖ standartlarına göre yapılmış ve yapısal özellikleri de Kruger'e göre değerlendi. Beta 1 alfa 6 integrin molekülünün varlığı bu moleküle karşı hazırlanan CD49f monoklonal antibadi ile immunhistokimyasal yöntemle belirlendi. Spermiyum hücrelerinde tutulumun yoğunluğunun daha belirgin görünmesi için zemin boyası olarak pikrik asit'in TBS'deki çözeltisi kullanıldı. (Prof. Dr. Deniz Erdoğan'ın önerisi ile).-105- Yapısal anomaliler piriform, akrozom ya da orta parçası bozuk, amorf başlı ve kuyruk anomalileri olarak belirlendi. Semen örnekleri yıkama işlemini izleyerek yeniden yapısal olarak değerlendirildi. Yıkama öncesi ve sonrası olgularda pı(X6 integrin tutulumu foto ışık mikroskobunda incelendi ve resimleri çekildi. Spermiyum sayısı 40 x 106/ml az olan oligoterato spermik hasta örneklerinde yapısal değerlendirme yapıldığında her iki grubun normal spermiyum hücrelerinde beta 1 alfa 6 intengrin molekülünün tutulumunun gözle görülür şekilde yüksek olduğu saptandı (p<0,01). Yıkama işleminin bu molekülün varlığında hiçbir etkisinin olmadığı gözlemlendi (p<0,01). Kruger'e göre normal sayılan hücrelerde Pı(X6 integrin molekülü tutulumu akrozom başlığın altındaydı. Amorf, yuvarlak ve sivri başlı olanlarda ise çoğunlukla tüm hücre zan çevresinde tutulumun belirgin olduğu görüldü.

-106- Vm- SUMMARY Pı(X6 integrin molecules are one of the membrane glycoproteins on the human spermatozoa. The relationship between the expression of integrin cell adhesion molecules and the fertilizing ability of human spermetozoa in vitro has great importance these day. In summary, this study has shown that between normozoospermic and oligotheratozoospernic samples are quantitative differences in expression of p/a6 integrin cell adhesion molecules in normal forms of spermatozoa. Washing procedure doesn't effect of pia6 integrins immunolabelling. The purpose of this study was to investigate the expression of P1OC6 integrin cell adhesion molecules (AM) of human spermatozoa and the relationship between PiCt6 integrin molecules and the morphology. Fresh semen samples were obtained from male partners of couples attending Başkent University, Assisted Reproduction Unit. The World Health Organization guidelines were used to characterize the semen samples as normal or abnormal acording to their concentration, 40 milion per ml as a cut of point. Spermatozoa were classified as normal, piriform acrosome defect, mid piece defect, amorph head, tail defect. Morphologies according to Kruger's strict criteria and AM assesment was also performed after washing procedure.-107- Monoclonal antibody against P1OC6 integrin and immunohistochemical tecniques were used to identify the presence of these molecules on spermatozoa. The percentage of spermatozoa showing strong immunolabelling with the monoclonal antibody was assesed in each sample acording to their morphology and photographed by light microscope. The relatoinship between immunlabelled PiGfe integrin results and the different morphology was examined. 1) Samples compared with different morphology as normal, piriform, acrosome defect, pin head, amorph head, tail defect, from their immunlabelled PıOfe integrin forms, with normal morphology had a significantly higher (p<0.01). In Oligo teratospermic samples showing abnormal forms as round, amorphous and pin head showed strong immunolabelling around the head. 2) After washing procedure there is no difference in both groups identified immuno histochemically for PıOfe integrins morphologically normal and abnormal forms of spermatozoa in semen. In conlusion the existance of PıOtö integrins immunohistochemically on spermatozoa showed in this study that concentration and morphology of semen parameters are not distinct factor for fertilization. The presence of PiOfe integrin during the fertilization, with other AM on oocyte and spermatozoa is the function of PıOtö integrins exists with other AM.