Remazol Brillant Blue Royal ve Drimaren Blue CL-BRnin beyaz çürükçül funguslar tarafından renk gideriminin araştırılması

Abstract

ÖZBu çalışmada, Pleurotus ostreatus, Coriolus versicolor ve Funalia trogiibeyaz çürükçül fungusları ile Remazol Brillant Blue R ve Drimaren Blue CL-BR'ninrenk giderimleri araştırılmıştır. Çalışmalar statik koşullarda, 30 oC ve pH 5.0'da 48saat sürdürülmüştür. Farklı boyar madde derişimlerinin çalışıldığı ortamlardaperiyodik olarak pH, kuru misel ağırlığı, renk giderimi, lakkaz aktivitesi, peroksidazaktivitesi, protein miktarı analizlenmiş, renk gideriminden sorumlu enzimsaptanarak, renk gideriminde kinetik parametreler hesaplanmıştır. Renk giderimiçalışmalarında tüm ortamlar için pH'ın 5,0 ile 4,75 arasında değiştiği, en yüksek renkgiderimi Funalia trogii ile; en düşük renk giderimi ise Pleurotus ostreatus ilesaptanmıştır. Her iki boyar maddenin çalışılan tüm derişimlerinde Pleurotusostreatus gelişimine, Drimaren Blue CL-BR'nin 60 mg/L ve üstü derişimlerindeCoriolus versicolor gelişimi üzerine toksik etkisi olduğu saptanmıştır. Çalışmalardaartan boyar madde derişimine bağlı olarak lakkaz ve peroksidaz aktivitelerinde artışbulunmuştur. En yüksek lakkaz aktivitesi Funalia trogii ile saptanırken en düşüklakkaz aktivitesi Pleurotus ostreatus ile saptanmıştır. Renk gideriminden sorumluolan enzimin saptanması amacıyla Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jelelektroforezi (SDS-PAGE) uygulaması yapılmıştır. SDS-PAGE uygulamasındansonra jellerinin boyar maddeler ile yıkanması sonucunda yaklaşık 56 kDa molekülağırlığına sahip proteinlerin bulunduğu bölgelerin renksizleştiği gözlenmiştir.Renksizleşen bölgelere lakkaz substratı olan guaikol uygulaması sonucunda bubölgelerde guaikolün lakkaz tarafından oksitlenmesi sonucu oluşan gülkurusu renginmeydana gelmesi renk gideriminden sorumlu olan enzimin lakkaz olduğunugöstermiştir. Renk giderim çalışmaları sonunda Km ve Vm kinetik parametrelerihesaplanmıştır. En yüksek renk giderimi hızı Funalia trogii'nin, en düşük renkgiderim hızının ise Pleurotus ostreatus'un kullanıldığı ortamlarda saptanmıştır.Anahtar Kelimeler: Beyaz Çürükçül Fungus, Remazol Brillant Blue R, DrimarenBlue CL-BR, Renk Giderimi, SDS-PAGE

ABSTRACTDecolorization of Remazol Brillant Blue R, Drimaren Blue CL-BR by usingthree white rot fungi named as Pleurotus ostreatus, Coriolus versicolor and Funaliatrogii was investigated in this study. Decolorization studies were continued for 48hours under static conditions at 30 oC and pH 5.0. pH, dry mycelium weight, dyeconcentration, laccase activity, peroxidase activity, protein content were analyzed,the enzyme responsible for decolorization was detected and kinetic parameters werecalculated for different dye concentrations. During 48 hours incubation period, pHalternated between 5.0 and 4.75. Maximum and minimum decolorization wasobtained by Funalia trogii and Pleurotus ostreatus respectively. Both dyes at allconcentrations were found to be toxic for Pleurotus ostreatus growth, whereas onlyDrimaren Blue CL-BR above 60 mg/L was found to be toxic for Coriolus versicolorgrowth. Laccase and peroxidase activities were increased by increasing dyeconcentrations. Maximum and minimum laccase activities were detected indecolorization media of Funalia trogii and Pleurotus ostreatus respectively. Sodiumdodecil sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used todetermine the enzyme responsible for decolorization. Gels of SDS-PAGE werestained with both dyes and colorless zones were obtained where the molecularweight of proteins were approximately 56 kDa. Occurrence of orange color byoxidation of laccase substrate named as guaicol after staining the colorless zones byguaicol, revealed that the enzyme responsible for decolorization is laccase. At theend of this study, kinetic parameters, Km ve Vm were calculated. Maximumdecolorization rate was detected with Funalia trogii and the minimum was detectedwith Pleurotus ostreatus.Keywords: White Rot Fungus, Remazol Brillant Blue R, Drimaren Blue CL-BR,Decolorization, SDS-PAGE