Biyoteknolojik yöntemler kullanılarak bazı deniz alglerinden beta-karoten üretimi üzerinde çalışmalar

Abstract

BİYOTEKNOLOJIK YÖNTEMLER KULLANILARAK BAZI DENİZ ALGLERİNDEN BETA-KAROTEN ÜRETİMİ ÜZERİNE ÇALIŞMALAR (Doktora Tezi) Marzieh AKBARI GAZİ ÜNİVERSİTES FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ Ağustos 1997 ÖZET Araştırma, Fars körfezin'deki çeşitli yerlerinden ve Şiraz'daki Maharlu tuz gölünden toplanmış farklı su örnekleri üzerinde yürütülmüştür. Bu örneklerden 7 adet Dunaliella susu izole ve identifiye edilmiştir. Mikroalglerin dört adedi D.viridis,, iki adedi D.salina ve bir adedi D.parva olarak tespit edilmiştir. Dunaliella suşlarınm Johnson sıvı besi ortamında maksimum düzeyde P- karoten üretilebilmesi için tuzluluk, sıcaklık ve ışık gibi optimum koşullar sağlanmıştır. Örnekler; %20'lık tuzlulukta, 25°C sıcaklıkta ve 3 700 lux ışıkta daha hızlı gelişerek, daha fazla P-karoten üretmişlerdir. Suşlann P-karoten üretimleri kantitatif olarak spektrofotometrik yöntemle saptanmıştır. Üretim miktarının artırılması için protoplast füzyon tekniği uygulanmıştır. Yüksek düzeyde P-karoten üreten atasal M2 ve M3 suşlan protoplsat füzyon denemelerine alınmışlardır. Yapılan deneylerde, M2 susu 1 0-2 M sodyum azid içeren Nutrient agar besi ortamında dirençlik göstermesi ve M3 susu %0,4 NaCl içeren Nutrient agar besiyerinde üreyebilmesi marker özeliği olarak, protoplast füzyon yönteminde kullanmıştır. Nutrient agar besiyerinde üreyen fuzantlardan 54 adet koloni seçilmiştir. Rekombinant protoplast frekansı %15 olarak saptanmıştır. Fuzantlar arasında F4 fuzantın en yüksek düzeyde P- karoten ürettiği belirlenmiştir. Örneklerin analizleri yüksek işlevli sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi ile tespit edilmiştir. M2 susunun kuru ağırlığının %6'sı, M3 susunun kuru ağırlığının %7'si ve F4 susunun kuru ağırlığının %9,3'ü p-karoten içerdiği tespit edilmiştir.Bilim Kodu : 401 01 02 Anahtar Kelimeler : Mikroalg, Dunaliella, 3-karoten üretimi, Etkileyen faktörler, Protoplast füzyon Sayfa Adedi : 176 Tez Yöneticisi : Doç. Dr. Yavuz BEY ATLI

Ill STUDIES ON THE PRODUCTION OF p -CAROTENE FROM SOME MARINE ALGAE BY USING BIOTECHNOLOGİCAL TECHNICS (Ph.D. Thesis) Marzieh AKBARI GAZI UNIVERSITY INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY August 1997 ABSTRACT This research studied on different water samples which collected from various regions of Persian Gulf and Maharlu saline lake in Shiraz. Seven strains of Dunaliella were isolated from these samples and identified. It was determinated that, four of this microalgae were D.viridis, two strains D.salina and the last one was D.parva. Dunaliella strains were grown in Johnson's broth medium for maximum P-carotene production. An condition such as salinity, temperature and light intensity were optimised. Growing cultures in 20% salinity, at 25°C temperature and 3700 lux illumination, the growth rate and P-carotene production were increased by the strains. The quantitative methods were used for estimating the amount of P-carotene produced by strains. For increasing in P-carotene production, the protoplast fusion was applied. M2 and M3 strains, which had the highest rate of P-carotene production were selected as parent strains. During experiment, M2 strain showed to be resistance to 10~2 M sodium azide in Nutrient agar medium and M3 strain able to growth in Nutrient agar medium contained 0,4% NaCl. These two strains carried two different markers for protoplast fusion studies. 54 colony were selected from fusants which grown in Nutrient agar medium. The recombination frequency was determinated as 15%. Between fusants, F4 had the highest amount of P-carotene production. The samples were analysed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Technics. The P~ carotene which were produced by the strains was evaluated as, 6% of M2, 7% of M3 and 9,3% of F4 strains of dry weight.IV Science code :401 01 02 Key Word : Microalga, Dunaliella, P-carotene production, Effected factors, Protoplast fusion Page number : 176 Adviser : Assoc. Prof. Yavuz BEY ATLI