İnsan vajinasından izole edilen Lactobacillus cinsi bakterilerin bazı probiyotik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

İNSAN VAJİNASINDAN İZOLE EDİLEN LACTOBACILLUS CİNSİ BAKTERİLERİN BAZI PROBİYOTİK ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ (Yüksek Lisans Tezi) Emine KILIÇ GAZİ ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ Haziran 2003 ÖZET Bu çalışmada, sağlıklı, hamile, HPV (+), menapoz, enfeksiyon varlığı, doğum sonrası ve adet düzensizliği özelliklerine sahip 19 kadının 10' un dan 58 adet Lactobacillus cinsi bakteri izole edilmiştir. Bakterilerin identifikasyon testleri sonucunda 12 adet Lactobacillus gassed, 9 adet Lactobacillus acidophilus, 9 adet Lactobacillus vaginalis, 8 adet Lactobacillus crispatus, 8 adet Lactobacillus delbrueckii spp. lactis, 3 adet Lactobacillus plantarum, 2 adet Lactobacillus jensenii, 2 adet Lactobacillus salivarius, 2 adet Lactobacillus cellobiosus, 1 adet Lactobacillus brevis, 1 adet Lactobacillus curvatus ve 1 adet Lactobacillus oris olarak tanımlanmıştır. Lactobacillus cinsi bakterilerinin asit ve hidrojen peroksit üretimleri belirlenmiştir. Asit üretimi % 0,27-133 olarak bulunmuştur. Hidrojen peroksit üretimleri spektrofotometrik olarak 1,01-15,50 ug/ml arasında, tetrametil benzidin ağarda nitel olarak % 41' i 2+, % 19' u 1+, % 40' i - bulunmuştur. Lactobacillus cinsi izolatla rının antimikrobiyal etkisi, agar difüzyon tekniği kullanılarak araştırılmıştır. Pseudomonas aeruginosa ATCC 29212 susu üzerine izolatların %85' i, Staphylococcus aureus ATCC 2392 susu üzerine izolatların %48' i, Salmonella enteritidis RSKK 171 üzerine izolatlarm %71' i, Escherichia coli ATCC 11230 üzerine izolatların %43' ü inhibisyon etkisi göstermiştir. Candida albicans AJD 180 ve C. albicans ATCC 10239 üzerine izolatlarm antimikrobiyal etkisi gözlenmemiştir. Lactobacillus cinsi izolatlarının test mikroorganizmaları üzerinde bakteriyosin etkileri11 belirlenememiştir. Lactobacillus cinsi izolatlannın amoksisilin (25 jıg), azitromisin (15 (J,g), kloramfenikol (30 xg), teikoplanin (30 ig), siprofloksasin (5 Hg), klaritromisin (15 yg), streptomisin (10 (ag) ve tetrasiklin (30 ag) antibiyotiklerine duyarlılık testleri disk difüzyon yöntemine göre yapılmış, sonuçlar NCCLS kriterlerine göre değerlendirilmiştir. Araştırmalar sonucunda, Lactobacillus cinsi izolatlarm siprofloksasin (%98) ve streptomisin (%93) antibiyotiklerine yüksek oranda dirençli olduğu belirlenirken, en yüksek duyarlılığın ise, klaritromisin (%95) ve tetrasiklin (%88) antibiyotiklerine gösterdikleri tespit edilmiştir. Ayrıca izokonazol ve oksikonazol antifungal ilaçların vajinadan izole edilen C. albicans AJD 180 üzerine inhibitörik konsantrasyonları belirlenmiştir. Lactobacillus cinsi izolatları üzerinde de her iki antifungal ilacın 0,2; 0,1 ve 0,05 J,g/ml konsantrasyonlarmdaki inhibisyon etkisi agar difüzyon yöntemi kullanılarak araştırılmıştır. Araştırma sonucunda her iki antifungal ilacm C. albicans AJD 180 üzerinde yüksek inhibisyon etkisi göstermesine rağmen, Lactobacillus cinsi izolatlarmda oksikonazol' un çok düşük inhibisyon etkisine sahip olduğu belirlenmiştir.Anahtar Kelimeler : Vajinal laktobasiller, antifungal, antibiyotik, antimikrobiyal aktivite, hidrojen peroksit, laktik asit, probiyotik

In this study, 58 strains of Lactobacillus species bacteria were isolated from 10 patients out of 19 women who were known to be healthy and/or in pregnant, HPV(+), in menopause, having an infection, in post delivery period or having irregular menstruation. As a result of the identification tests the bacteria isolated were identified as 12 L. gassed, 9 L. acidofilus, 9 L. vaginalis, 8 L. er ispat us, 8 L. delbrueckii spp. lactis, 3 L. plantar urn, 2 L.jensenii, 2 L. salivarus, 2 L. cellobiosus, 1 L. brevis, 1 L. curvatus and 1 L. oris. Amount of acid and hydrogen peroxide production of Lactobacillus species was estimated. The amount of acid produced was found to be between 0.27-1.33 %. The amount of hydrogen peroxide produced was found to be between 1.01-15.50 ug/ml with the spectrophotometric method, where as qulitatively 41% of it was estimated to be double positive, 19% of single positive and 40% of it was negative in agar with tetramethylbenzidine. The antimicrobial effect of Lactobacillus was studied by using the agar diffusion technique. Lactobacillus had an inhibitory effect on the 85% of P. aeruginosa ATTC 29212 strains, on the 48% of S. aureus ATTC 2392 strains, on the 71% of S. enteritidis RSKK 171 strains and on the 43% of E. coli ATTC 11230 strains. An antimicrobial effect on the C. albicans AJD 180 ve C. albicans ATCC 10239 strains could not be observed. None of the Lactobacilli were found to have a bacteriocin effect on the test bacteria.IV susceptibility tests of isolated Lactobacillus species to amoxycillin (25 ^g), azithromycin (15 p.g), chloramphenicol (30 /ig), teicoplanin (30 fig), ciprofloxacin (5 fig), clarithromycin (15 fig), streptomycin (10 xg) and tetracycline (30 fig) were determined using the disk diffusion method following NCCLS standards. In the results of the research, most of the Lactobacillus species were found to be highly resistant to ciprofloxacin (98%) and streptomycin (93%) and most sensitive to clarithromycin (95%) and tetracycline (88%). In addition, the inhibitory concentrations of isoconazole and oxyconazole that were used as antifungal drugs were determined on C. albicans AJD 180. The inhibitory effect of both antifungal drugs at 0.2; 0.1 and 0.05 ig/ml concentrations on Lactobacillus isolates were investigated by using the agar diffusion method. At the end of the study, although both antifungal drugs showed a highly inhibitory effect on C. albicans AJD 180, it was determined that oxyconazole had a very low inhibitory effect on Lactobacillus isolates. Key Words: Vaginal lactobacilli, antifungal, antibiotic, antimicrobial activity, hydrogen peroxide, lactic acid, probiotic