Pankreas dokusunda hücre yüzeyine bağlı glikokonjugat profillerinin mikroskobik işaretleme yöntemleri ile irdelenmesi

Abstract

Bu tezde, pankreas β hücre ve asiner hücre yüzey glikokonjugatlarından, N-Asetilglukozamin oligomerleri, sialik asidi (GlcNAc, Neu5Ac), özellikle β-GlcNAc tipi sialik asidi floresan işaretli Wheat Germ Agglutinin (WGA) lektini kullanılarak, işaretlemek amaçlanmıştır. Deneylerde, İstanbul Üniversitesi Deneysel Tıp Enstitüsü'nden alınan kontrol diyeti ve yağlı diyet uygulanarak kısmen obeziteye bağlı metabolik sendrom oluşturulmuş iki farklı grup sıçan pankreası kullanılmıştır. Ekzokrin ve endokrin pankreas dokusu hücre zarlarında yer alan glikan birimlerinin, fluorescein işaretli lektinlerle özgün olarak işaretlenmede kullanılabilirliği araştırılmıştır. Bu amaçla çalışmada, hücre yüzeylerinde bulunan N-Asetilglukozamin oligomerleri, özellikle β-GlcNAc tipi olmak üzere sialik asiti işaretleyen FITC-WGA ile floresan mikroskopta mikrograflar alınarak görüntülenmiştir. Elde edilen verilere göre değerlendirilen mikrografların sonucunda, bu birimler, görüntüler çok net olmamakla birlikte, yağlı diyet uygulanan sıçanlarda kontrol grubuna göre, hem ekzokrin pankreasta asiner hücrelerde hem de endokrin pankreasta beta hücrelerde GlcNAc oligomerleri, sialik asit ve özellikle β-GlcNAc tipi sialik asit oldukça yaygın ve yoğun olarak işaretlenmiştir. Bu sonuçlar, DAPI boyamasında da bir artmanın olmamasıyla ve her iki floresan boyamanın çakıştırılmasıyla desteklenmiştir. Bu çalışmada kullanılan yöntemin, hücre yüzeylerinde tanıma tutunma mekanizmalarına aracılık eden şeker birimlerinin uygulanan diyetle artmasıyla Diabetes mellitus başta olmak üzere otoimmun rahatsızlıkları belirlemede kullanılabileceği, metabolik hastalıklara yönelik erken tanı ve/veya tedavi çalışmalarında, hastalığa ilişkin yönlendirilmiş ilaç çalışmaları için yol gösterici olabileceği önerilmiştir. Anahtar kelimeler: FITC-WGA, Diabetes mellitus, sialik asit, β-GlcNAc tipi sialik asit, floresan mikroskop.

In this thesis, it's purposed that staining by using of FITC-WGA of the N-acetylglucosamine oligomers, sialic acid and especially β-GlcNAc type sialic acid these are from among of the cell surface glycoconjugates of pancreatic beta and acinar cells. Using two different group rat pancreases for the experiments provided from Istanbul University Institute of Experimental Medicine that applied control diet and high fat diet constituted obesity induced metabolic syndrome. It was researched that the availability of glycan units on the surface of cells of exocrine and endocrine pancreas tissue for specific labelling with fluorescent labelled lectins. With this purpose, N-acetylglucosamine oligomers on cell surface were displayed with taking micrographs by FITC-WGA that is labelled especially β-GlcNAc type sialic acid. Evaluated micrographs according to the data, this units with not very unclear images, rats that fed with high fat diet GlcNAc oligomers, sialic acid and β-GlcNAc type sialic acids on both acinar cells of exocrine pancreas and beta cells of endocrine pancreas stained more extensive and more intense to control group rats. This conclusions were supported with no increase in DAPI staining and merged two staining. It is suggested that this method, increased glycan units by applied diet these mediate mechanisms of recognition and adhesion on cell surface, it may be using for detection of autoimmune disorders notably Diabetes mellitus, may be guiding to early diagnosis and/or treatment studies for metabolic diseases , directed medicine studies.Key Words: FITC-WGA, Diabetes mellitus, sialic acid, β-GlcNAc type sialic acid, fluorescence microscopy.