Dietil pirokarbonat, homosistein tiyolakton ve metilglioksal ile modifiye edilen nisinin özellikleri

Abstract

Dietil pirokarbonat (DEPK), homosistein tiyolakton (HSTL) ve metilglioksal (MG) ile modifiye edilen nisinin bazı özelliklerinin incelenmesi bu tez çalışmasının temel amacını oluşturmuştur. Ticari nisin, diklorametan ile çöktürme ve katyon değiştirici kolon kromotografisi yöntemleri birleştirilerek en az %95 düzeyinde saflaştırılmıştır. Yüksek saflıktaki Nisin Z DEPK ile %13,68, HSTL ile %6,30 ve MG ile %70,51 düzeyinde modifiye edilmiştir. Tripsin ve termolisin enzimleriyle hidrolizasyon ve trisin-sodyum-dodesil-sülfat poliakrilamid jel elektroforez analiziyle modifikasyonun gerçekleştiği gösterilmiştir. DEPK ve MG ile modifiye edilen nisin, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactococcus lactis ssp. cremoris AÜ, Enterococcus faecium ATCC 9097, Listeria monocytogenes NCTC 5348 ve Escherichia coli RSKK bakterilerine karşı antibakteriyel aktivite göstermemiştir. HSTL ile modifiye edilmiş nisin ise sadece Enterococcus faecium ATCC 9097'ye karşı antibakteriyel aktivite göstermiş ve minimum inhibisyon konsantrasyon (MİK) değeri 16,75 μM olarak saptanmıştır.

The main purpose of this study is to investigate some properties of nisin modified with diethylpyrocarbonate (DEPC), homocysteine thiolactone (HCTL) and methylglyoxal (MG). Commercial nisin was purified to at least 95% using the method developed by combining dichloromethane precipitation and cation exchange column chromatography methods. High-purity Nisin Z was modified by 13.68% with DEPC, 6.30% with HCTL and 70.51% with MG. The modification was confirmed by using hydrolyzing activities of trypsin and thermolysin enzymes followed by tricine-sodium-dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The nisin modified with DEPC or MG did not show any antibacterial activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactococcus lactis ssp. cremoris AÜ, Enterococcus faecium ATCC 9097, Listeria monocytogenes NCTC 5348 or Escherichia coli RSKK. HCTL modified nisin had a little antibacterial activity against Enterococcus faecium ATCC 9097 and the minimum inhibitory concentration (MIC) of HCTL modified nisin was 16.75 μM against Enterococcus faecium ATCC 9097.