Prenatal uygulanan diklofenak sodyumun postnatal sıçanlarda renal COX-2 dağılımının stereolojik yöntemlerle araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, nonsteroidal antiinflamatuvar ilaç olan diklofenak sodyumun bir COX-2 inhibitörü olarak gebelik süresince uyguladıktan sonra doğan sıçanların dördüncü haftalarındaki böbreklerinde COX-2 ekpresyonu stereolojik ve immünohistokimyasal olarak araştırıldı. Toplam 12 adet erişkin albino dişi sıçan diklofenak sodyum ve kontrol olmak üzere iki gruba ayrıldı. Gebeliklerinin beşinci gününden itibaren 1mg/kg diklofenak sodyum intraperitoneal yolla enjekte edildi. Kontrol grubunaysa herhangi bir işlem yapılmadı. Postnatal dört haftalık sıçanlardan altı adet diklofenak sodyum ve altı adet kontrol grubu oluşturuldu. Derin anestezi altında perfüze edilip tespit edildi. Rutin doku takipleri yapıldı. Diklofenak ve kontrol grubundan toplam 12 böbrekten kesitler alındı. Preparatların stereolojik incelemesinde, noktalı alan ölçüm cetveli ile hacim; tarafsız sayım çerçevesi ile hücre sayımı yapılıp, istatistiksel analizde Mann-Whitney U testi kullanıldı. İmmünohistokimyasal değerlendirmede boyanma yoğunlukları skorlama tekniğiyle incelendi; her iki grubun postnatal sıçan böbreklerinin maküla densa, proksimal tübül, distal tübül, korteksteki tübüller, medulladaki tübüller, toplayıcı tübüller ve glomerüllerinde değişik yoğunluklarda COX-2 ekpresyonu tespit edildi. Skorlama yöntemiyle yapılan değerlendirmede; COX-2 boyanma derecelerinin iki grup böbreklerinin maküla densa ve toplayıcı tübüllerinde diğer bölgelere nispeten daha yüksek olduğu gözlendi. Maküla densa haricindeki bahsedilen diğer tüm bölgelerde, kontrol grubuna nazaran diklofenak grubunun COX-2 ortalama boyanma yoğunluğunun daha az olduğu; proksimal tübül, distal tübül ve korteksteki tübüllerde boyanma yoğunluğu kontrol grubuna kıyasla azlığı nispeten farklı skorla tespit edildi. Stereolojik hesaplamalar neticesinde gruplar arasındaki fark (p<0,05) istatistiksel açıdan anlamlı bulundu. Böbrek volümü diklofenak sodyum grubu böbreklerinde daha yüksek çıkarken; kontrol grubu böbreklerinin COX-2 tarafından nüfus edilen hücre miktarının daha fazla olduğu tespit edildi.

In this study, expression of COX-2 was stereologically and immunohistochemically investigated by administrating the diclofenac sodium which is a nonsteroidal antiinflammatory drug and as a COX-2 inhibitor during pregnancy of rats then by examining their fourth week offsprings' kidneys. Totally 12 adult albino female rats were divided into two groups as diclofenac sodium group as experimental group and control group. Diclofenac sodium was injected (1mg/kg) intraperitoneally to the diclofenac group on the fifth day of pregnancy. The control group did not undergo any procedures. Six diclofenac sodium groups and six control groups were formed from postnatal four-week-old rats. It was perfused under deep anesthesia and transferred to the formoldehide. Routine tissue follow-up was performed. A total of 12 kidneys were collected from the diclofenac and control groups. After incubation, staining was performed. In the stereological examination of the preparations, the volume with point grid; Cell counting was performed with unbiased counting frame and Mann-Whitney U test was used for statistical analysis. In immunohistochemical evaluation, staining intensities were evaluated by scoring technique; COX-2 expressions of postnatal rat kidneys of both groups were found at different concentrations of macular densa, proximal tubule, distal tubule, tubules in the cortex, tubules in the medulla, collecting tubules and glomeruli. It was observed that COX-2 staining levels were significantly higher in the macular densa and collector tubules of the two groups. In scoring method evaluation; In all other regions except macula densa, the mean dye density of the diclofenac group was lower than that of the control group; Proximal tubule, distal tubule and cortical tubule staining intensity was determined with a relatively different score compared to the control group. As a result of stereological calculations, nuance between two clusters (p <0.05) was found statistically significant. Renal volume is higher in the kidneys of the diclofenac sodium group; control group's kidneys were found to have more cells penetrated by COX-2.