Midye manto dokusu Beta-glukozidazı

Abstract

ÖZET Bu çalışmada Türkiye sahillerinde bulunan midye türü olan Mytilus galloprovincialis'in manto dokusu P-glukozidazı elde edildi ve bazı kinetik özellikleri incelendi. Rumelikavağı deniz kıyısından toplanan midyelerin kabukları çıkartıldıktan sonra manto kısımları ayrılarak homojenize edildi. ?- glukozidaz aktivitesi gösteren fraksiyon, midye manto homojenizatının santrifüje edilmesiyle elde edilen ham ekstreden % 40 - 60 amonyum sülfat konsantrasyonunda çöktürülmesi suretiyle ayrıldı, dializ edildi ve hidroksilapatit kolona uygulandı. Adı geçen fraksiyonun pH'sı 6.8 olan artan molaritede fosfat tamponu ile yapılan kolon kromatografîsi sonucunda enzimin 50 mM fosfat tamponu ile elüe edilebileceği saptandı. Bu surede midye manto dokusu p-glukozidazı 13 kez saflaştırılarak elde edildi. ?-glukozidazın en yüksek aktivitesini pH 4.8-5.0 değerleri arasında gösterdiği, optimum temperarürünün ise 49°C olduğu belirlendi. Midye manto p-glukozidazının 4-nitrofenil- ?-D-glukopiranozide karşı gösterdiği en yüksek reaksiyon hızının ve Km değerinin sırasıyla 3.49 mM ve 1.046 x 10`2M olduğu bulundu.

SUMMARY In the present study ?-glucosidase was isolated from the mantle tissue of Mytilus galloprovincialis, a mollusc species existing in the coasts of Turkey, and some of its kinetic properties were examined. After removing the shells of the mollusc collected from Rumeli Kavağı seabord, the mantle tissue was separated and homojenized. The crude extract of the mande tissue was obtained by centrifugation and ?-glucosidase active fraction was precipitated from the crude extract at 40 % - 60 % ammonium sulphate concentration. This fraction was diaHsed and applied to hydroxylapatite column. During the elution, molarity gradient was performed with phosphate buffers of pH 6.8 and it was observed that the enzyme existed in 50 mM eluate. Thereupon, mollusc mande tissue 0- glucosidase was purified 13 fold. It was determined that optimum pH of the mande tissue ?- glucosidase of the mollusc existed between pH 4.8-5.0 and optimum temperature at 49°C. Vmax and Km of p-glucosidase was found 3.49 mM and 1.046 x 10` M for 4-nitrophenyl- ?-D-glucopiranoside.