Campylobacter jejuni izolasyonunda bazı kültürel tekniklerin karşılaştırılması ve tavuk etlerinde termofilik Campylobacterlerin araştırılması

Abstract

ÖZET Yapılan bu araştırmada, araştırmanın ilk aşamasında, piliç etlerinde termofilik Campylobacter araştırmada en sık kullanılan kültürel ekim tekniklerinden 5 tanesi karşılaştırıldı ve en fazla koloni veren teknik ortaya çıkarılmaya çalışıldı, ikinci aşamada ise Kars ilinde satışa sunulan piliç etleri ve bazı iç organlarından muhafaza şekli ve süresi dikkate aliarak termofilik Campylobacter araştırıldı. Ekim telaıiMerinin karşılaştırılması amacıyla, C. jejuni ile yapay olarak kontamine edilen 300 adet piliç butundan mCCDA besiyeri yüzeyine Stern ve ark. (112), Beuchat (24), Collins (36) ve Humphrey (66)'in bildirdiği şekilde doğrudan ekimler yapıldı. Satış yerlerinden alınan örneklere ise, araştırmanın ilk kısmında en çok sayı veren teknik olduğu için, parçalama homojenizatinin doğrudan ekim tekniği uygulandı. Bu örneklerden aynı zamanda zenginleştirme de yapıldı. Doğrudan ekimlerde mCCDA besiyeri, zenginleştirme besiyeri olarak çift güçlü VTP-Brucella-FBP besiyeri kullanıldı. Ekim tekniklerinin araştırılması sonucunda, parçalama homojenizatinin 0. 1 mT sinden 240; yüzey yıkama solüsyonunun 0.1 mi' sinden 131: filtreden 61; örnekten doğrudan alınan sıvaptan 44; yüzey yıkama solüsyonundan alman sıvaptan 18 ve filtratm 0.1 ml'sinden 5.7 koloni izole edildi. Satış yerlerinden alınan 25 adet bir günlük tüm piliç ve 25 adet 1 günlük karaciğerin tamamında (%100) termofilik Campylobacter tespit edildi, incelenen 240 adet dondurulmuş tüm piliç, göğüs, but, kanat, ciğer ve taşlığın doğrudan ekimi sonunda örneklerin %42.8'inde, zenginleştirme sonucunda ise %60.4'ünde termofilik Campylobacter tespit edildi. Dondurulmuş muhafazanın 10, 20 ve 30. gününde örneklerin doğrudan ekim sonucunda sırasıyla %96.6, 63.3 ve 1 1.6'smda; zenginleştirme sonucunda ise %100, 100 ve 36.6'sında etken saptandı. 45 günlük örneklerin %5'inde sadece zenginleştirme sonucunda etken izole edilebildi, incelenen örnekler içerisinde karaciğer örnekleri en çok kontamine olan ürünler olarak tespit edildi. Taze örneklerden elde edilen türlerin %72'si C. jejuni, % 24'ü C.coli ve %4'ü C. lari iken; dondurulmuş örneklerden elde edilen türlerin % 97.1'i C. jejuni ve %2.9'u C. coli olarak tespit edildi. C. lari dondurulmuş örneklerin hiçbirinde tespit edilemezken, C. coli sadece 10 günlük dondurulmuş örneklerden elde edilebildi. Muhafaza 54süresinin uzamasının termofilik campylobacterlerin yıkımlanmasında önemli bir faktör olduğu tespit edildi. Karşılaştırılan doğrudan ekimler içerisinde parçalama homojenizatmdan doğrudan ekim yapmanın elde edilen koloni sayısı bakımından diğer tekniklere göre daha etkili olduğu; zenginleştirmenin dondurulmuş örneklerde izolasyon oranını artırdığı görüldü. 0.45 um por çapma sahip filtrelerin etkenlerin tutulmasında yeterli olduğu ve etkenlerin sadece %1.14'ünün geçişine izin verdiği saptandı. Filtre, katı besiyeri yüzeyine yapıştınlırken, aynı petrinin iki değişik sahasına tatbik etmenin izolasyonda kolaylık sağladığı görüldü. Anahtar kelimeler: Campylobacter, termofilik, piliç eti, insidens.

SUMMARY At the first step of the investigation, it was attempted to compare five of the most commonly used cultural sampling techniques and then to find out the most productive one. At the second step, the presence of thermophilic Campylobacters on chicken carcass and other parts sold in Kars, Türkiye were investigated taking into account of storage time and conditions. For the comparison of sampling techniques, artificially contaminated 300 chicken drumsticks were directly inoculated onto mCCD agar using the technique's) of Stern et al (1 12), Beuchat (24), Collins (36) and Humphrey (66). The samples collected from markets were investigated by direct inoculating from homogenised samples, since this technique was found to be superior to the others, in addition, these samples were enriched using a double strength VTP-Brucella-FBP medium. As a result of researching inoculation techniques, 240 colony from 0.1ml of piercing homogenate; 131 from 0.1ml of surface washing liquid; 61 from filter; 44 from swabs taken directly from samples, 18 swabs taken from surface washing liquids and 5.7 from 0.1 ml of filtrate were isolated. Thermophilic Campylobacters were isolated from all the 25 chicken carcasses and livers (fresh, for 24h) collected from various shops. Thermophilic Campylobacters were isolated from 42.8% of frozen samples (a total of 240 whole chicken carcasses, breasts, drumsticks, wings, livers and gizzards) after direct plating, however, after enrichment they were detected in 60.4% of the samples. Thermophilic Campylobacters were isolated from 96.6%, 63.3% and 11.6% of samples after 10, 20 and 30 day of freezing period, respectively by using direct inoculation, enrichment method yielded 100%, 100% and 36.6% of samples positive, respectively. Thermophilic Campylobacters were isolated from 5% of samples stored for 45 days using only enrichment method. Among the samples examined, liver was the most contaminated one. Species isolated from fresh samples were 72 % C. jejuni, 24% C. coli, 4% C. lari and 97.1% C. jejuni, 2.9% C. coli were isolated from frozen samples. C. lari was not isolated from any of the frozen samples while C. coli was isolated from only samples frozen for ten days. It was observed that prolonged storage period was an important factor for the destruction of thermophilic Campylobacters. 56Among the direct inoculation techniques, inoculation directly from piercing homogenate were found to be superior to the other techniques in terms of the number of colonies obtained; enrichment was an important factor to increase isolation rate. A 0.45 um membrane filter was quite successful in order to prevent microorganisms passing through and only 1.14 % managed to pass. Applying filters to two different areas of an agar was found to be easier and faster than applying at only one area for isolation purposes. Key words: Campylobacter, thermophilic, chicken meat, incidence 57