Melatonin uygulanan farelerin karaciğer dokusunda glutatyon peroksidaz`ın immunohistokimyasal dağılımı ve RT PCR ile gen ekspresyonu

Abstract

Bu çalışma, güçlü bir antioksidan madde olan melatoninin eksojen uygulamasının fare karaciğerinde antioksidan enzimlerden biri olan glutatyon peroksidaz'ın gen ekspresyonuna etkisinin ve enzimin immunohistokimyasal lokalizasyonunun incelenmesi amacıyla yapılmıştır.Çalışmada kullanılan 24 adet erkek swiss albino fare, deneme (n=8), sham (n=8), kontrol (n=8) olmak üzere üç gruba ayrıldı. Deneme grubuna 4 hafta boyunca etanolde çözdürülüp serum fizyolojikle sulandırılmış 10 mg/kg dozda melatonin (i.p.) uygulandı. Sham grubuna da sadece ethanol ve serum fizyolojik solüsyonu uygulandı. Kontrol grubuna ise hiçbir uygulama yapılmadı. Deney süresi sonunda doku örneklerinde RT-PCR yöntemi ile GPx 1 enziminin gen ekspresyonu, enzimin karaciğer dokusunda immunohistokimyasal lokalizasyonu ve rutin histolojik boyamalarla (PAS, H.E., Triple boyama) da dokunun normal histolojik yapısı incelendi.Yapılan incelemeler sonucunda deneme grubunda GPx 1 enziminin ekspresyon düzeyinin sham ve kontrol grubuna göre istatistiksel açıdan anlamlı (P<0,05) bir artış gösterdiği görüldü. Yapılan immunohistokimyasal incelemelerde de, immunoreaktivitenin özellikle Kiernan aralığı ile vena sentralisler etrafındaki hepatositlerde yoğunlaştığı ve reaksiyonun hepatositlerde çoğunlukla hem sitoplazmik hem de nükleer olarak bulunduğu görüldü. Ayrıca, rutin histolojik incelemelerde gruplar arasında hiçbir farklılığa rastlanmadı.Anahtar sözcükler: Melatonin, Karaciğer, GPx 1, RT-PCR, İmmunohistokimya.

This study was carried out to determine effect of exogenous administration of melatonin, which is a potent antioxidant substance, on gene expression of antioxidant enzyme glutathione peroxidase in mice and to detect localization of this enzyme with immunohistochemistry in liver.Twenty-four male swiss albino mice were divided into three groups as follows: sham (n=8), control (n=8) and treatment (n=8). Melatonin (10 mg/kg) dissolved in ethanol and diluted with isotonic NaCl solution was administered for 4 weeks to treatment group through intra peritoneal injection. Ethanol and isotonic NaCl solution was administered to sham group. No application was made to the control group. At the end of experimental period, gene expression of GPx 1 enzyme with RT-PCR method, immunohistochemical localization of the enzyme, and normal histological structure of tissues by routine histological staining methods (H.E., PAS, Triple staining) were examined in liver tissue samples.In conclusion, the level of GPx 1 enzyme expression was shown significantly (P<0,05) higher in treatment group compared to sham and control groups. Immunohistochemical investigations reveal increase in immunoreactivity especially in hepatocytes surrounding Kiernan area and vena centralis. Immunoreactivity was seen both nucleus and cytoplasm in hepatocytes. Moreover, there was no difference between groups in routine histological investigations.Key words: Melatonin, Liver, GPx 1, RT-PCR, Immunohistochemistry.