Anemone albana stev. subsp. armena (sinüzit otu) bitkisinden elde edilen ekstraktların antioksidan aktivitelerinin tayini ve fenolik asit profilinin HPLC-UV ile belirlenmesi

Abstract

Anemone albana Stev. Subs armena bitkisinin havada kurutulmuş yaprak ve gövde kısmından Soxhlet, ultrasonik banyo ve hidroliz işlemleriyle elde edilmiş olan ekstraktların toplam fenolik madde içerikleri, antioksidan aktiviteleri ve ekstraktlardaki fenolik asit içeriği araştırıldı.Çözücü olarak metanol kullanılarak yapılan ekstraksiyonlarda en yüksek ekstraksiyon verimi Soxhlet ekstraksiyonundan elde edilirken (%24,95±1,30), bunu ultrasonik banyo ekstraksiyonu (%21,00±1,34) ve hidroliz işlemiyle yapılan ekstraksiyon (%1,60±0,07) takip etti. Soxhlet verimi diğer verimlerden anlamlı derecede daha yüksek çıktı (p<0.05).Toplam fenolik madde içerikleri açısından Soxhlet tekniği yine en yüksek değeri (2,79±0,20 mg GAE/100 g kuru numune) ortaya koydu. Fakat ultrasonik banyo tekniği ile elde edilen değerden (2,21±0,20 mg GAE/100 g kuru numune) anlamlı derecede farklı olmadığı bulundu (p>0,05). En düşük değeri (0,07±0,02 mg GAE/100 g k. num.) hidroliz ekstraktları sergiledi.DPPH radikal süpürme antioksidan aktivite tayini deneylerinde en yüksek IC50 değerini (µg/mL) hidroliz ekstraktı sergiledi (35,33±1,24). Bunu sırasıyla ultrasonik banyo (57,43±1,08) ve Soxhlet (59,37±1,85) takip etti. Burada da Soxhlet ve ultrasonik banyo ekstraktları arasında anlamlı bir fark bulunmadı (p>0,05). Cu-II iyonu indirgeme gücü antioksidan kapasitesi (CUPRAC) deneylerinde en yüksek değeri (mmol TEAC/Kg numune) ultrasonik banyo ekstraktları sergilerken, bunu Soxhlet ve hidroliz ekstraktları takip etti: Sırasıyla 357,22±10,73 - 322,78±27,99 ve 47,39±2,55). Fe-II iyonu indirgeme gücü antioksidan kapasitesi (FRAP) deneylerinde en yüksek değeri (µM) Soxhlet ekstraktları ortaya koyarken (67,38±7,64), ultrasonik banyo ekstraktları (58,81±0,42) ve hidroliz ekstraktları (30,95±1,48) bu değeri takip ettiler. Hem CUPRAC hem de FRAP deneylerinde Soxhlet ve ultrasonik banyo ekstraktlarına ait değerler arasındaki fark anlamlı bulunmadı (p>0,05).Ekstraktların fenolik asit profilini belirlemek üzere yapılan RP-HPLC-UV-DAD analizi, tüm ekstraktlarda benzoik asit bulunduğunu (µM Protokatekualdehit Eşdeğeri olarak: Soxhlet ekstraktları için 110, ultrasonik banyo ekstraktları için 73 ve hidroliz ekstraktları için 77), ilave olarak hidroliz ekstraktında protokatekualdehit (34 µM PE) bulunduğunu ortaya koydu.Toplam fenolik madde ile antioksidan aktivite arasındaki ilişki FRAP ve CUPRAC testleri için pozitif, DPPH testleri için negatif bulundu.Anahtar Kelimeler: Anemone albana Stev. Subs armena, Sinüzit otu, Ekstraksiyon verimi, Toplam fenolik madde, Antioksidan aktivite, DPPH, CUPRAC, FRAP, Fenolik asit, HPLC-UV-DAD analizi

The methanolic extracts obtained from different parts (leaves and stems) of Anemone albana Stev. Subs. armena (Sinüzit otu) plant by using Soxhlet, ultrasound assisted and acidic hydrolysis techniques were investigated in terms of total phenolic contents, antioxidant activity (capacity), and phenolic acid profile.The highest extraction yield obtained from Soxhlet ectraction with the value of %24,95±1,30. This value was followed by ultrasound assisted and hydrolysis extracts (%21,00±1,34 and %1,60±0,07 respectively). The difference between Soxhlet and ultrasound assisted extract yields was found to be significant (p<0,05).Soxhlet extracts showed the best total phenolic matter content with the value of 2,79±0,20 mg GAE/100 g air dried sample. These values were 2,21±0,20 for ultrasound assisted extracts and 0,07±0,02 for hydrolysis extracts. The difference between total phenolic content values of Soxhlet and ultrasound assisted extracts was not significant (p>0,05)In DPPH assay tests, the best IC50 value (as µg/mL) was exhibited, surprisingly, by hydrolysis extracts with the value of 35,33±1,24. The difference between the IC50 values of ultrasound assisted (57,43±1,08) and Soxhlet (59,37±1,85) extracts was not significant (p>0,05). In CUPRAC assay tests, in contrast to the DPPH assay, while the best value was exhibited by ultrasound assisted extracts, hydrolysis extracts was the worst (357,22±10,73 and 47,39±2,55 mmole TEAC/Kg sample). This value was obtained as 322,78±27,99 for Soxhlet extracts. In FRAP assay tests, Soxhlet extracts showed the best FRAP values with the mean value of 67,38±7,64 µM. Ultrasound assisted extracts and hydrolysis extracts followed this value (58,81±0,42 and 30,95±1,48 µM, respectively). Both in CUPRAC tests and in FRAP tests, the difference between Soxhlet and ultrasound assisted extracts were not found significant (p>0,05).In order to determine phenolic acid profile of the extracts, RP-HPLC-UV-DAD analysis was applied. The analysis showed that among 15 phenolic acid standard investigated, while all extracts contained benzoic acid, hydrolysis extracts also contained protocatechualdehyde, additionally. Protocatechualdehyde equivalent concentrations of these phenolic acids were calculated (for benzoic acid: 110 µM PE in Soxhlet, 73 µM PE for ultrasound assisted, and 77 µM PE in hydrolysis extracts; for protocatechualdehyde: 34 µM PE in hydrolysis extracts).Total phenolic content-antioxidant activity relationship was found to be positive for CUPRAC and FRAP assays, while it was negative for DPPH assay.Key Words: Anemone albana Stev. Subs armena, Sinüzit otu, Extraction Yield, Total phenolic content, Antioxidant activity, DPPH, CUPRAC, FRAP, Phenolic acid, HPLC-UV-DAD analysis.