Cutaneous leishmaniasis`li hastaların tanı ve takibinde real-time PCR kullanımı

Abstract

Kutanöz Leishmaniasis'li Hastaların Tanı ve Takibinde Real Time PCR KullanımıAyşe Nuriye VARIŞLIMikrobiyoloji, Yüksek Lisans TeziKutanöz leishmaniasis tanısında kullanılan geleneksel tanı metodları; direkt mikroskobi vekültürdür. Bunlar genellikle zaman alıcı ve yorucudur, düşük duyarlılıktadır. Real- timekantitatif PCR tekniği parazitolojide son zamanlarda kullanıma girmiştir. Real- time PCRtekniği tamamen kantitatif sonuç verir, hızlı bir yöntemdir, amplifikasyon sonrası elektroforezyapılmasına ihtiyaç göstermez ve daha hassastır. Biz, kutanöz leishmanisis'li hastalarınbiyopsi örneklerinde leishmania parazitinin tesbiti için kantitatif bir test olan real- time PCRtekniğini kullandık. Bu çalışmanın amacı, kutanöz leishmaniasis'li hastaların tanısında real-time PCR'ın etkinliğini belirlemek ve konvansiyonel tanı metodlarıyla karşılaştırmak idi.Leishmaniasis için test edilen, hasta olduğu varsayılan kadın ve erkeklerden 50 ince iğnebiyopsi örneği toplandı. Bu örnekler 3 gruba ayrıldı. lk gruptaki örnekler Giemsa ile boyandı.Diğer grup örnekler kültür için N. N. N besiyerine bırakıldı. Son gruptaki örnekler ise i-cycler sistemiyle real- time PCR `da çalışıldı. Klinik tanı altın standart olarak alındığındaPCR`ın duyarlılığı % 92, kültürün duyarlılığı % 50, direkt mikroskobinin duyarlılığı ise % 40olarak bulundu. Parazitemi çok geniş bir dağılım göstermekteydi (9 - 155,000 parazit/ ml,ortalama olarak 457 parazit/ ml ). Kutanöz leishmaniasis'in tanısında real- time PCR `ınkullanımı hassasiyet sağlar, tanıyı özgülleştirir ve hastanın takibinde kullanışlı bir metoddur.Bu sonuçlar, real- time PCR'ın, kutanöz leishmaniasis'li hastaların tanı ve takibinde bizebüyük kolaylıklar sağlamakta olduğunu göstermiştir.Anahtar Kelimeler: Kutanöz leishmaniasis, Direkt Mikroskopi, Kültür, Real- time PCR,Tedavi

The Use Of Real Time PCR n Diagnosis And Follow Up Of Patients WithCutaneous LeishmaniasisAyşe Nuriye VARIŞLIMicrobiology, Mastres ThesissConventional diagnostic methods in diagnosis of leishmaniasis are direct microscopyand culture. These are often time-consuming, difficult and low sensitive. Real-timequantitative polymerase chain reaction has recently been used to parasitology. This PCRtechniques are truly quantitative, are quick to perform and require no manipulations post-amplification and more sensitive. We have used a real-time PCR quantitative test for thedetection of leishmania parasite in biopsi samples of patients with cutaneous leishmaniasis.The aim of this study was to asses the efficacy of real- time PCR method and compared withconventional diagnostic methods in establishing the diagnosis of patients with cutaneousleishmaniasis. A total of 50 needle biopsy samples collected prospectively from both men andwomen were tested for leishmaniasis. These samples were divided into three groups. Firstgroup samples were stained with the Giemsa. Another group samples were given in mediumof N.N.N for culture. Last groups samples were studied real time PCR with the i-cyclersystem. With clinical diagnosis as the gold standard, real- time PCR had a sensitivity of 92 %(46/50), 50 % (25/50) for culture and 40 % (20/50) for microscopy of direct. Parasitemiacould vary by a wide range (9 to 155,000 parasites/ml, with a median of 457 parasites/ml).The use of real time PCR in diagnosis of cutaneous leishmaniasis would provide sensitive andspecific diagnosis and could improve patient management. These results indicate that realtime PCR will be a great help to us for diagnosis and follow-up of patients with cutaneousleishmaniasis.Key words: Cutaneous leishmaniasis, Direct Microscopy, Culture, Real- time PCR, Therapy.