Şanlıurfa yöresinde görülen sıtma olgularının tanısında konvansiyonel yöntemlerle moleküler yöntemlerin (PCR) karşılaştırılması ve tür tayini

Abstract

Sıtma, bütün dünyada sık görülen ve halen önemini koruyan bir halk sağlığı problemidir. Sıtmanın geleneksel tanısı, hastanın parmak ucundan alınan bir damla kan örneği ile hazırlanan kalın damla ve ince yayma preparatların mikroskopta incelenerek, Plasmodium türlerinin saptanması temeline dayanmaktadır. Bu çalışmada, duyarlılığının yüksek olduğu bildirilen Real-Time PCR'ın sıtma tanısında kullanılması, sonuçlarının mikroskobi ve hızlı tanı testi sonuçları ile karşılaştırılması amaçlanmıştır.Çalışmaya sıtma şüphesi olan 64 kişi dahil edilmiştir. Hastaların tümünden iki ayrı kan örneği alınmıştır. Parmak ucundan alınan kan örneklerinden kalın damla ve ince yayma preparatları hazırlanmıştır. Venöz alınan 5 ml kan örnekleri EDTA'lı tüplere alınarak, DNA ekstraksiyonu ve hızlı tanı testi çalışılıncaya kadar -20oC de saklanmıştır. DNA ekstraksiyonu ticari kit kullanılarak yapılmıştır. Amplifikasyon için Plasmodium genus spesifik primerler ile P.vivax tür spesifik primerler kullanılmıştır. Çalışmaya alınan sıtma şüpheli 64 kişiden 25'i (% 39) mikroskobi ve hızlı tanı testi ile pozitif, 39'u (% 61) negatif bulunmuştur. Real-Time PCR ile 28 kişi (% 44) pozitif, 36 kişi (% 56) negatif olarak bulunmuştur.Real-Time PCR'ın duyarlılığı ve özgüllüğü %100 bulunurken, mikroskobi ve hızlı tanı testinin duyarlılıkları %89.3, özgüllükleri ise %100 olarak bulunmuştur.Bu çalışmada, mikroskobinin kolay, ucuz, hızlı olduğu ama, deneyimli personel gerekliliği, paraziteminin düşük olduğu durumlarda yanlış negatif sonuç verilebilmesi gibi bazı dezavantajlarının olması nedeniyle, tanıda moleküler yöntemlerin kullanılmasının duyarlılığı arttıracağı sonucuna varılmıştır.

Malaria is an important and common health problem that has been seen all over the world. traditional diagnosis of malaria is to detect Plasmodium species in the thick and thin blood smears by microscopy. In this study, the position of high sensitivity Real-Time PCR methods in malaria diagnosis has been researched and Real-Time PCR results have been compared with the results of blood smears microscopy and rapid diagnostic tests.In this study, from the sixty-four persons with suspect of malaria blood samples were taken in to the tubes with EDTA and slides, prepared thick and thin blood smears. For amplification Plasmodium genus specific primers and P.vivax species specific primers had been used. 25 of 64 (39 %) samples were detected as positive by microscopy and rapid diagnostic test, 39 (61 %) samples were detected as negative. Using Real-Time PCR, 28 persons (44 %) have been positive and 36 persons (56 %) negative.Specificity and sensitivity of Real-Time PCR method is found 100 %. Sensitivities of microscopy and rapid diagnostic test are found 89,3 %, specificities are found 100 %.In this study, we found out that the microscopy is easy, cheap and rapid but there are some disadvantages like requiring persons, and in the case of low level parasitemia detecting wrong negative results, etc. Particularly for these reasons, we concluded that molecular methods are more suitable for the diagnosis of malaria than the conventional methods.