Alzheimer hastalığı tanısında APP ilişkili gen ve miRNA seviyelerinin biyolojik belirteç olarak kullanılmasının SH-SY5Y insan nöroblastoma hücrelerinde incelenmesi

Abstract

Alzheimer Hastalığı (AH) geri dönüşümü olmayan, progresif nörodejeneratif bir hastalıktır. Hastalığın patogenezinin temelinde amiloid-beta (Aβ) monomerlerinin toksik oligomerlere dönüşerek plaklar oluşturması yatmaktadır. MikroRNA (miRNA)'lar hayatta kalma ve nöronal fonksiyonlar için esastır. Birçok miRNA'nın, Alzheimer hastalığı nöropatolojisinde de önemli olduğu gösterilmiştir.Bu bağlamda gerçekleştirilen çalışmada SH-SY5Y insan nöroblastoma hücrelerinde yeterli Aβ42 ekspresyonu ile Alzheimer modeli oluşturularak APP ve β-sekretaz genlerinin hedefi olduğu düşünülen miRNA'ların, bu genlerin anlatım seviyeleri üzerindeki olası rollerinin araştırılması amaçlanmıştır.Bu amaçla SH-SY5Y ve kontrol olarak insan fibroblast hücreleri uygun koşullarda kültüre edilerek; Aβ42 protein uygulaması yapıldı. Hücrelerdeki amiloid üretimininkalitatif ve kantitatif ölçümleri, ELISA ve MTT analizleri ve kongo kırmızısı boyama yöntemi ile gerçekleştirildi. Hastalıkla ilişkilendirilen miRNA'lar ve bu miRNA'larla ilişkilendirilen genlerin ifade seviyeleri Gerçek-Zamanlı PZR ile kantitatif olarak belirlendi.Sonuç olarak, hastalık modellemesi sonrasında miRNA'lar ve onlarla ilişkilendirilen genlerin hastalığın nöropatolojisi üzerine olası rolleri gösterilmeye çalışılmış ve hastalıkla ilişkili bazı miRNA ve genlerin ifade seviyelerinde Aβ42 uygulaması sonrasında istatistiksel olarak anlamlı değişimler saptanmıştır.

Alzheimer's Disease (AD) is a non-reversible, progressive neurodegenerative disease. In the pathogenesis of the disease, amyloid-beta (Aβ) monomers are converted into toxic oligomers and then creates plaques. MicroRNAs (miRNAs) are essential for survival and neuronal function. Many miRNAs have been shown to be important in AD neuropathology.In this context, we are aimed to investigate the possible roles of miRNAs thought to be the targets of APP and β-secretase genes on expression levels of these genes by forming Alzheimer's model with sufficient Aβ42 expression in SH-SY5Y human neuroblastoma cells.For this purpose, SH-SY5Y and human fibroblasts cells which is negative control, are cultured under optimum conditions; Aβ42 protein treatment was applied.Qualitative and quantitative measurements of amyloid production in cells were performed by ELISA and MTT analyzes and congo red staining.Expression levels of the miRNAs associated with the disease and the genes associated with these miRNAs were quantitatively determined by Real-Time PCR.In conclusion, after disease modeling, miRNAs and genes associated with them were tried to be shown on the neuropathology of the disease and statistically significant changes were observed after application of Aβ42 expression levels of some miRNAs and genes related to the disease.