Topraktan izole edilen Bacillus thuringiensis suşlarının karakterizasyonu ve insektisidal aktivitelerinin araştırılması

Abstract

Kimyasal mücadelenin çevreye verdiği zararlı etkilerden ve böceklerin kimyasallara karşı direnç kazanmasından dolayı son yıllarda biyolojik mücadele çalışmaları daha da önemli yer tutmaktadır. Biyolojik mücadelede insektisidal kristal protein üreten Bacillus thuringiensis suşlarının mikrobiyal insektisit olarak kullanılmasına olan ilgi iyice artırmıştır. Bu nedenle zararlılara karşı yeni Bacillus thuringiensis suşlarının bulunması üzerine yapılan çalışmalar hız kazanmıştır. Bu çalışmada, Giresun Adası toprak örneklerinden izole edilen dört B. thuringiensis suşu; kristal morfolojisi, SDS-PAGE analizi, plazmit profilleri, cry gen içerikleri, yağ asit analizi ve biyokimyasal testleri yapılarak tanımlanmıştır. İzolatların kristal boyama sonucunda bipiramidal ve şekli belirlenemeyen kristaller içerdiği görülmüştür. İzolatlar cry1, cry2, cry3 ve cry4 genel primerleri kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonuna tabi tutulmuş ve izolatların bu cry genlerini taşımadığı belirlenmiştir. İzolatların plazmit profilleri incelendiğinde T3 izolatının 3, T1 izolatının 4, T4 izolatının 5, T2 izolatının ise 6 plazmit taşıdığı görülmüştür. Agelastica alni ve Ephestia kuehniella larvaları üzerinde izolatların insektisidal aktiviteleri araştırılmış ve Agelastica alni larvaları ile yapılan bioassaylerde en fazla insektisidal etki %84,6 ölüm oranı ile T2 bakterisinde görülmüştür.

Recently, biological control studies have became more important due to harmful effects of chemicals on environment and resistances of the insects to these chemicals. The interest of Bacillus thuringiensis strains producing insectisidal proteins as microbial insecticide has increased. Therefore, studies on the isolation of new Bacillus thuringiensis strains for using against the insect pests have became popular. In this study, four B. thuringiensis strains isolated from the soil samples in Giresun Island have been identified as crystal morphology, SDS-PAGE analysis, plasmid profile, cry gene content, fatty acid analysis and biochemical tests. The result of crystal painting of isolates shows that isolates contain bipyramidal and undefined crystals. Polymerase chain reaction (PCR) was performed on isolates by using general primers (cry1, cry2, cry3 and cry4). It is determined that isolates don't contain these kind of cry genes. While examining plasmid profiles of isolates, T1, T2, T3 and T4 have 4, 6, 3, 5 plasmid profiles, respectively. Insecticidal activities of Isolates on Agelastica alni and Ephestia kuehniella larvas researched and the most insecticidal effect by %84,6 death rate in T2 bacteria have seen in the bioassays with Agelastica alni larvas.