Bacillus sp. suşundan bakteriyosin izolasyonu ve karakterizasyonu

Abstract

Günümüzde kimyasal koruyucuların besinin doğallığını, kalitesini ve değerini düşürdüğü bilinmektedir. Bu nedenle antimikrobiyal maddelerin gıda korunmasında kullanımı artmıştır. Dolayısıyla da yeni antimikrobiyal maddelerin araştırılması ve keşfi büyük önem taşımaktadır.Bu çalışmada Bacillus sp. T69 izolatından bakteriyosin izolasyonu ve karakterizasyonu yapılmıştır. Bakteriyosin aktivitesi üzerine sıcaklığın, pH'ın, enzimlerin, bazı organik çözücülerin, deterjanların ve kimyasalların etkisi araştırılmıştır. Molekül ağırlığı ise SDS-PAGE ile belirlenmiştir.Bacillus sp. T69 izolatının luria bertani besiyerinde, 30 °C'de 24. saatte maksimum düzeyde bakteriyosin ürettiği belirlenmiştir. Bakteriyosin düşük sıcaklıklarda (10-40 C) aktivitesi yüksek iken yüksek sıcaklıklarda (>60°C) aktivite kaybetmektedir. Bacillus sp. T69'un sentezlediği bakteriyosinin pH 5-10 arasında aktivite gösterdiği bulunmuştur. Bakteriyosinin proteinaz K, tripsin, iki-merkaptoetanol, SDS ve Triton X-100'e karşı duyarlı ancak, bazı organik çözücülere (kloroform, metanol, etanol, hekzan, aseton, izopropanol, asetonitril, butan-1-ol) ve EDTA'ya karşı ise dayanıklı olduğu belirlenmiştir. SDS-PAGE çalışması sonucunda bakteriyosinin molekül ağırlığının yaklaşık 15 kDa olduğu bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: Bacillus, bakteriyosin, antibakteriyal

Nowadays, it is known that chemical preservatives reduce the naturalness, nutritional quality and value of the food. Therefore, it increased to use in food protecting of antimicrobial substances. Thus, investigation and discovery of new antmicrobial substances is of great importance. In this study, isolation and characterization of bacteriocin from Bacillus sp. T69 isolate was done. The effects of temperature, pH, enzymes, some organic solvents, detergents and chemicals on bacteriocin activity were investigated. Its molecular weight was determined by tricine-SDS-PAGE.It was determined to produce bacteriocin in maximum level at 30 C 24 th hour in luria bertani medium of Bacillus sp. T69 isolate. While bacteriocin activity is high at low temperatures (10-40 °C), activity is lost at high temperatures (> 60). It was found to show activity between at pH 5 and 10 of bacteriocin from Bacillus sp. T69. It was determined that bacteriocin was sensitive to protease K, trypsin, two-mercaptoethanol, SDS andTriton X-100, but resistant to against some organic solvents (chloroform, methanol, ethanol, hexane, acetone, isopropanol, acetonitrile, butan-1-ol) and EDTA. As a result of SDS-PAGE analysis, it was found that molecular weight of bacteriocin was about 15 kDa.Key Words: Bacillus, bacteriocin, antibacterial