Papatyadan (Matricaria chamomilla L.) lipaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, ülkemizde Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen papatyadan (Matricaria chamomilla L.) lipaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi.Petrol eteri ile yağı uzaklaştırılmış papatya bitkisi 0.06 M fosfat tamponu (pH=7,0) ile homojenize edildi. Lipaz esteraz aktivitesi gösteren homojenizatın %70'lik (NH4)2SO4 kesiti elde edildi. Dializden sonra bu kesit DEAE-selüloz kolonlara uygulanarak lipaz enzimi 26 kez saflaştırıldı. Saflaştırma işlemlerinde protein miktarı Lowry ve E280/E260 Warburg yöntemlerine göre, lipaz esteraz aktivitesi ise Erlanson yöntemine göre tayin edildi. SDS-PAGE elektroforezi sonucunda saflaştırılan enzimin molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu.Optimum pH ve sıcaklık değerleri, pH ve sıcaklık stabiliteleri, optimum reaksiyon süresi, optimum reaksiyon süresinin tayini, uygun enzim ve substrat konsantrasyonu belirlendi. Papatyadan saflaştırılan lipazın optimum pH'sının 12, optimum sıcaklığının 50°C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendiğinde, lipazın ilgisinin en çok p-nitrofenil palmitatta olduğu ve bu substrata karşı Km ve Vmax değerlerinin sırasıyla 0,2899 mM ve 144,93 Ünite olduğu saptandı.

In this study, lipase was firstly purified from chamomile (Matricaria chamomilla L.) being abundant in Giresun (Turkey) and surroundings and the kinetic properties of the enzyme were investigated. Chamomile, being fat-free with petroleum ether extraction, were homogenized with 0.06 M sodium phosphate buffer (pH=7.0) 70% of (NH4)2SO4 fraction of lipase esterase activity homogenate was obtained. After dialysis, this fraction was applied respectively to hydroxyapatite and DEAE-cellulose columns, and lipase was purified 26 times. In the purification process, the protein content was determined by using Lowry and E280/E260 Warburg methods, and lipase esterase activtiy was assayed with Erlanson's method. The purified enzyme, which showed SDS-PAGE, had a molecular weight of 30 kDa.The optimum pH and temperature values, pH and temperature stabilities, optimum reaction time, appropriate concentrations of the enzyme and substrate were investigated. It was also found that the lipase purified from chamomile had an optimum pH value of 12 and an optimum temperature of 50°C.When the high affinity of the enzyme agains different substrates was examined, the highest value was obtained with p-nitrophenyl palmitate, with respectively Km and Vmax values being 0.2899 mM and 144.93 Units.