Kestaneden (Castanea sativa) saflaştırılan lipaz enziminin çeşitli taşıyıcılara immobilizasyonu

Abstract

Lipazlar, sistematik adı triaçilgliserol açilhidrolaz olup, sulu ortamda triaçilgliserollerin hidrolizini katalizleyerek di- ve monoaçilgliserollere ve gliserole dönüştürebilen, susuz ortamda ise ester bağlarını oluşturabilen enzimlerdir. Enzimleri kimya ve biyoteknoloji alanında daha çekici hale getirebilmek için özellikle son 30 yıl içinde enzim immobilizasyonu üzerine çalışmalar yoğunlaşmıştır. İmmobilize enzimlerin endüstride, birçok alanda kullanımının yaygınlaştığı görülmektedir. Bu çalışmada, kestane (Castanea sativa) tohumundan ilk kez saflaştırılan lipaz enziminin çeşitli taşıyıcılara adsorpsiyon, kovalent ve iyonik bağlama yöntemleri ile immobilize edilmesi ve kinetik özelliklerinin incelenmesi amaçlanmıştır. İmmobilize edilen lipaz enziminin kinetik özellikleri incelenerek serbest lipaz enzimi ile kıyaslaması yapılmıştır. Saflaştırılan lipaz çeşitli taşıyıcılar üzerine adsorpsiyon, kovalent ve iyonik bağlama yöntemleri ile immobilize edildi. Protein miktarı Lowry yöntemine göre, lipaz esteraz aktivitesi ise Erlanson yöntemine göre tayin edildi. Kestaneden saflaştırılan lipazın optimum pH'sının 10, optimum sıcaklığının 30°C olduğu bulundu. Kestane lipazının çeşitli taşıyıcılar (Silikajel, deniz kumu, Amberlite IRA-900, alumina, cam boncuk) üzerine immobilize edilerek immobilize lipazların optimum pH, optimum sıcaklık, optimum reaksiyon süresinin tayini gibi kinetik özellikleri de incelendi.

Lipases are enzymes whose systematic name is triacylglycerol acylhydrolase which is able to catalyze the hydrolysis of triacylglycerols in aqueous medium to convert di and monoacylglycerols and glycerol to ester bonds in anhydrous mediumIn order to make the enzymes more attractive in the field of chemistry and biotechnology, the focus has been on enzyme immobilization in the last 30 years. The use of immobilized enzymes seems to be widespread across the industry.In this study, it is aimed to investigate the immobilization and kinetics of lipase enzyme purified from chestnut (Castanea sativa) seeds by adsorption, covalent and ionic binding methods to various carriers. The kinetic properties of the immobilized lipase enzyme were examined and compared with the free lipase enzyme.Purified lipase was immobilized on various supports by adsorption, covalent and ionic attachment methods. In the purification process, the protein content was determined by using Lowry method, and lipase esterase activtiy was assayed with Erlanson's method. Immobilization of the lipase purified from chestnut seeds on several supports (Silikagel, seasand, Amberlite IRA-900, alumina, glass beads), kinetic properties such as optimum pH and temperature, optimum reaction time were also examined.