Nikelin fare karaciğeri mikrozomal karışık fonksiyonlu aksidaz enzim sistemine etkisinin araştırılması

Abstract

- 80 - VI. ÖZET Bu çalışmada nikelin fare karaciğeri mikrozomal karışık fonksi yonlu oksidazları üzerine etkileri çeşitli yönleri ile araştırılmıştır: Öncelikle her enzim aktivitesi için optimum pH, protein miktarı ve substrat konsantrasyonu araştırılmıştır. Dpiimum şartlar sırasıyla; Ani lin 4-hidroksilaz (AH) enzim aktivitesi için 25 C de pH'sı 6.B olan D.l M potasyum fosfat tamponu, 3.0 mg protein ve 10 mM anilin, etilmorfin N-de- metilaz (EMND) için 25 C'de pH'sı 7.8 olan 0.1 M potasyum fosfat tamponu, 3.5 mg protein ve 10 mM etilmorfin -HCJ ve aminopirin N-demetilaz (AMND) için 25 C'de pH'sı 7. B olan 0.1 M potasyum fosfat tamponu, k.B mg protein ve 20 mM aminopirin şeklinde saptanmıştır. Nikelin (0.25 mmol İMİ C1`-6H 0 /kg sc) zamana bağlı olarak fare karaciğeri AH, EMND aktiviteleri ile hekzobarbital uyuma süresi (HUS) üze rine in vivo etkisi incelendiğinde, anlamlı inhibisyonların AH aktivitesin- de 8. saatte, EMND aktivitesinde 16. saatte ve HUS ta anlamlı uzamanın 8. saatte oluştuğu belirlenmiştir. Maksimum inhibisyon ise AH de 8 ve 16. sa atlerde, EMND de 16. saatte ve HUS' ta maksimum uzama 16. saatte gözlenmiş tir. AH, EMND ve HUS `un kB. saatte kontrol düzeylerine döndükleri saptan mıştır. Nikelin ( sc, öldürülmeden 16 saat önce) doza bağlı olarak fare karaciğeri AH, EMND ve HUS üzerine in vivo etkisi incelendiğinde AH üzerine etkili en düşük dozun 0.06 mmol/kg, EMND ve HUS üzerine etkili en düşük dozun ise 0.25 mmol/kg olduğu belirlenmiştir. AH' ta etki 0.25 mmol/kg dozunda maksimuma ulaştığı ve daha yüksek dozlarda (0,375 ve 0.50 mmol/kg) etkinin artmadığı gözlenmiştir. EMND ve HUS'ta da yüksek dozlarda (0.375 ve 0.50 nmol/kg.) etkide artma görülmemiştir.- 81 - Farelere öldürülmeden 72, UB ve 2k saat önce fenobarbital (FB) (75 mg/kg, i.p.) veya 3 metilkolantren (3MC) enzim indükleyicisi olarak verilmiştir. Ayrıca bu kimyasal maddeler uygulanmış diğer gurup hayvanla ra öldürülmeden 16 saat önce nikel (0.25 mmal l/liCl`/6H?D /kg, sc) de enjek te edilmiştir- Önce FB ve sonra nikel enjekte edilmiş hayvanların enzim aktivitelerinin nikele duyar oldukları gözlenmiştir. Ancak nikelin önceden FB almış hayvanların enzim aktivitelerinde oluşturduğu etkisinin indüklen memiş hayvanların enzim aktivitelerinde oluşturduğu etkisinden daha az olduğu etkisinden daha az olduğu saptanmıştır. Benzeri duyarlılık önce 3MC ve arkadan nikel alan hayvanların enzim aktivitelerinde de gözlenmiştir. Ancak 3 MC enjekte edilmiş hayvanlarda nikelin AH aktivitesinde oluşturduğu inhibisyonun indûklenmemiş hayvanlardaki enzim aktivitesinde oluşturduğu inhibisyona göre daha güçlü olduğu görülmüştür.

-82- VII. SUMMARY The effect of nickel on liver microsomal mixed-function oxidases of male mouse has been examined in various aspects. The optimum conditions (pH, protein amount, substrate concentra tion) for the maximum enzyme activities were determined. The determined optimum conditions were as follows: Aniline 4-hydroxylaze (AH): D.l M potassium phosphate buffer, pH 6.8 (25DC), 3.0 mg protein and ID mM aniline. Ethylmorphine N-demethylaze (EMND): 0.1 M potassium phosphate buf fer, pH 7.6 (25 C), 3.5 mg protein and 10 mM ethylmorphine -HCİ Aminopyrine N-demethylaze (AMND): 0.1 M potassium phosphate buffer pH 7.8(25DC), k.Q mg protein and 20 mM aminopyrine Time course effect of nickel on mouse liver AH, EMND and hexobar- bital sleeping time (HST) has been studied. Significant inhibition of AH activity and prolangat'ion of HST occured 8 hr after l/liC,`. 6H_0 injection (D,25rnmol/kg,sc.) reached maximum reduction and prolongation at 8,16 and 16 hr, respectively and returned to baseline at 48 hr. In EMND activity significant and maximum inhibition occured 16 hr after nickel inje. tiDn. IMo significant inhibition was observed after 48 hr. The dose-related effect of nickel on mouse liver AH, EMND and HST has been as well examined. The minimally effective dose of nickel necessary to inhibit AH was 0,06 mmol/kg and to inhibit EMND and prolong HST were 0,25 mmol/kg. maximally effective dose of nickel far AH was 0.25 mmol/kg. Higher doses of nickel (0,375 and 0,50 mmol/kg) did not patentiate enzyme activities and duration of HST to any greater degree.-83 - Animals mere recived phenobarbital (PB) (75 mg/kg, i.p.) or 3 methylcholanthrene (3MC) (20 mg/kg, i.p.) 72, ^8 and 2k hr before sacrifice as inducers. Designated groups of these animals also received nickel 16 hr before sacrifice. PB treated animals receiving nickel were also sensitive to nickel induced inhibitions and prolongation in enzyme activities and HST, although the extent of the alterations by nickel in PB treated animals was less than that observed in non - induced animals. The magnitude of the re duction in AH activity by nickel in 3 MC treated animals was more than that observed in non-induced animals whereas the opposite was observed in EMIMD and HST. In vitrp addition of nickel chloride to an incubation mixture produced a concentratron dependent inhibition of hepatic AH activity whereas biphasic effects en BfO and AMND activities were observed. In addition, in vitro effects of nickel on mouse rat not liver enzyme activities and NADPH dependent lipid peroxidation have been examined. EMND and AH of mouse liver were found the be more sensitive to nickel than those of rat. NADPH dependent lipid peroxidation was significantly increa sed in both species. The increase was about 3.k in mice and about 1.8 in rats.