Kabakulak virüs antikorlarının belirlenmesinde ELISA ve hemaglütinasyon önlenim testlerinin karşılaştırılması

Abstract

- 77 - ÖZET Bu çalışmada, değişik yas gruplarından temin edilen 405 serum örneğinde Mumps spesifik antikorlar, HA-Ö ve ELISA metodu ile araştırılmıştır. Spesifik viral antijen, Mumps virüsünün vero hücre kültüründe üretilmesiyle hazırlanmıştır. Kontrol antijen içinde, benzer şekilde hazırlama işlemi yapılmıştır. Mumps antijeninin HA titresi 1/64 olarak belirlenmiş, HA-Ö testinde, 4 HA Ünitesi antijen içeren Mumps virus antijeni kullanılmıştır. HA-Ö testinden önce nonspesifik inhibitörler ve heterofil antikorlar, serumun ön işlemlerden geçirilmesi ile kaldırılmış tır. Bu yöntemde, önce ısı inaktivasyonu yapılarak daha sonra kobay eritrositleri ve sodyum periyodat kullanılmıştır. ELISA'da, polystyrene mikropleytler kullanılarak indirekt metod uygulanmıştır. Antijen, kontrol antijen ve serum dilusyonları blok titrasyonla saptanmıştır. Konjugat olarak peroksidazla işaretli anti human IgG ve IgM, substrat olarak da OPD kullanılmıştır. Değişik yas gruplarına ait 405 serum örneğinde, Mumps spesifik antikorlar önce HA-Ö testi ile araştırılmıştır. HA-Ö testi ile 0-15 yas grubuna ait 53 serumun 45' inde (% 84.9) pozitiflik saptanırken, 46-60 yas grubunda ve 31 serumun 26'sında (% 83.9) pozitiflik saptanmıştır. Hamile serumlarında ise, 102 serumun 89'unda (% 87.3) pozitiflik belirlenmiştir. Toplam olarak 405 serumun 347'si (% 85.7) HA-Ö testiyle pozitif bulunmuştur.- 78 - Tarafımızdan hazırlanan ELISA ki ti ile, Mumps IgG ve IgM antikorları ayrı ayrı araştırılmıştır. 0-15 yas grubuna ait 53 serumun 41 'inde (% 77.4) Mumps IgG antikoru pozitif bulunurken, aynı yas grubunda 3 serumda (% 5.7) IgM antikoru pozitif bulun muştur. 16-30 yas grubunda ve 154 serumun 134'Unde (% 87.0) Mumps IgG antikoru pozitif olarak saptanmış, IgM antikoru ise 4 serumda (% 2.6) pozitif bulunmuştur. 102 hamile serumun 91 ' i (% 89.2) ELISA IgG pozitif olarak saptanırken, 6' sı (% 5.9) ELISA IgM ile pozitif bulunmuştur. Toplam 405 serumun 349'u (% 86.2) ELISA IgG ile 16'sı (% 4.0) ELISA IgM ile pozitif olarak belirlenmiştir. Tek basına IgM pozitif serum sayısının ise 3 olduğu saptanmıştır. Ayrıca 88 serum örneği, ticari Mumps ELISA kiti (Virotech) ile de test edilmiştir. Sonuçları hazırladığımız ELISA kiti ile karşılaştırdığımızda uyumluluk görülmüştür. Bulgularımız; Vero hücre kültüründe ürettiğimiz Mumps antijenlerinin kullanılmasıyla uygulanan HA-Ö ve ELISA testinin duyarlık ve özgüllük açısından uyumlu, ancak ELISA'nın daha güvenilir bir test olduğunu, hazırladığımız ELISA'nın ticari ELISA kitinden daha ucuz ve rutinde rahatlıkla kullanılabileceğini göstermektedir.

- 79 - SUMMARY In this study Mumps specific antibody were investigated with ELISA and HA-I test in 405 sera obtained from different age groups. Specific viral antigen was prepared with Mumps virus which were produced in vero cell. The control antigen was prepared in the same way. Hemagglutinin titre of Mumps virus antigen was determined as 1/64 and Mumps virus antigen containing 4 HA units were used. Before the HA-I test nonspecific inhibitors and heterofil antibodies of sera were removed by heat inactivation, guinea pig red blood cells and Na periodate. In ELISA indirect techique applied by using polystyrene microtitre plates. Antigen, control antigen and serum dilutions were determined by using block titrations. Peroxidase linked anti-human IgG and IgM were used as co jugate and OPD as substrate. 405 sera samples belonging to different aged group, spesific antibodies first were tested by HA-I test. In this test 53 sera obtained from 0-15 aged group, 45 sera (84.9 %) were proven seropositive while in 46-60 age group 26 out of 31 sera (83.9 %) were proven positive. 102 sera obtained from pregnant women 89 (87.3 %) were proven seropositive. In total 347 out of 405 (85.7 %) were proven seropositive by using HA-I test.- 80 - Mumps IgG and IgM antibodies were investigated individually with ELISA which is prepared by us. This way while 41 (77.4 %) out of 53 sera mumps IgG antibodies were found to be seroposi tive ; only 3 (5.7 %) sera IgM antibodies were found to be positive in aged group 0-15. In 16-30 aged group 134 (87.0 %) IgG antibody seropositive and 4 (2.6 %) IgM were proven seropo sitive in 154 sera. With pregnant women seropositive figures were showen as 91 (89.2 %) for IgG and 6 (5.9 %) for IgM in 102 sera samples. In total, using ELISA, out of 405 sera samples, 349 (86.2 %) IgG and 16 (4 %) IgM were found seropositive. 88 sera samples were tested using commercial ELISA (Virotech) and results were proven consistent. Results: Using Mumps antigen, produced in vero cells by us, the sensitivity and specificity of HA-I and ELISA tests were proven consistent, but the results shown ELISA is more reliable. ELISA test prepared in our laboratory costs less and gave similar results thus this test can be used comfortably.