P53 gen mutasyonlarının değişik moloeküler teknikler kullanılarak araştırılması

Abstract

ÖZET : p53 GEN MUTASYONLARININ DEGİŞÎK MOLEKÜLER TEKNİKLER KULLANILARAK ARAŞTIRILMASI p53 geni, hücre differansiasyonunu etkilemesi ile tümör baskılayıcı gibi etki gösteren bir gen olup, 17. kromozomun kısa kolunda (pl3) yer almaktadır. p53 genindeki akkiz mutasyonlar, en sık görülen tümör spesifik genetik değişiklikler olup birr çok kanser tipinde yayınlanmıştır. Toplam 11 eksonu olan p53 geninin belirli bölgelerinde, özellikle de 5-8. eksonlarmda mutasyonlar sık olarak gözlenmektedir (25). Tümör oluşumunda çok önemli rolü olan p53 geninde ortaya çıkan değişik mutasyonlar m incelenmesi için, polimeraz zincir reaksionu; restriktion endonükleazlarla ile belirleme; yüksek konsantrasyonlu poliakrilamid gel elektroforezi, single strand conformation polimorfism ve DNA dişi analizi gibi değişik moleküler teknikler kullanılmaktadır. Bu çalışmanın amacı, p53 gen mutasyonlar mı saptayacak bası moleküler tekniklerin kurulması olarak belirlenmiştir. Yöntemlerin kurulması sırasında değişik tümör örneklerinde çalışılırken, yirmiyedi tümör örneğinden yedi tanesinde kodon 248' de bir mutasyon varlığı belirlenmiştir. Ayrıca bir AMML+OOGS tanısı olan hastada SSCP sonrası bir mutasyon olasılığı belirlenmiştir. Bu mutasyonun 248 ve 249. uncu kodonlarda olmadığı gösterilmiştir. Kesin tanı için DNA dizi analizine gereksinim bulunmaktadır. Ayrıca, hepatosellüler karsinomada yaptığımız 5 tümör dokusunda, literatürde sık olarak saptanan ve aflatoksinle maruziyete bağlanan kodon 249 mutasyonu, belirlenememiştir.

ABSTRACT : DETECTION OF p53 GENE MUTATIONS WITH THE USE OF MOLECULAR TECHNIQUES Mutations of the p53 tumour suppressor gene on chromosome 17p are a common genetic change in the malignant progression of many cancers. The incidence and pattern of mutations of the p53 tumor suppressor gene have been shown to differ among different cancer types and even among the same cancer types with different etiological backgrounds. p53 gene has 11 exons in which exons 5-8 are more prone to mutations. The aim of this study was to establish the molecular analyses such as polymerase chain reaction; single-strand conformational polymorphism (SSCP) and direct detection of point mutations in the p53 gene. Seven out of 27 samples showed a probable CD 248 mutation which was easily detected by Msp I. In a patient, presented with Acute Myelomonocytic Leukemia with Orbito ocular granulocytic Sarcoma (OOGS), following SSCP, an abnormal shift was detected in exon 7. Further we showed that this was not due to a mutation in CD's 248- 250. Sequencing is needed for further discrimination. CD 249 point mutation is common in hepatocellular carcinoma in regions where aflatoxin is increased. 5 tumour samples from Turkey did not show this mutation.