Hazır sığır kıymalarında verotoksin oluşturan Escherichia coli 0157:H7 izolasyonu

Abstract

6. ÖZET Araştırmamızda, 60 hazır sığır kıyma örneği yanında, 20'si genç dana, 60 tanesi de erişkin sığırdan alınan 80 dışkı örneği, E.coli 0157:H7 yönünden incelendi. Kıymalarda hiç E.coli 0157:H7 izole edilemezken dışkı örneklerinde 4 adet (85) E.coli 0157:H7 izole edildi. Kültür yöntemiyle yürütülen bu çalışmada temel besiyerleri olarak novobiocin ilave edilen modifiye EC broth (mEC+n), CT-SMAC, EMB agar ve fluorocolt E.coli 0157:H7 agar kullanıldı. Katı besiyerlerinin, genel olarak E.coli 0157:H7 ile karıştırılabilecek sorbitol negatif bakterileri tam olarak elimine etmede yetersiz olduğu gözlendi. Bununla birlikte, fluorocolt E.coli 0157:H7 ağarda gerek sorbitol gerekse MUG reaksiyonlarının daha iyi değerlendirildiği görüldü. İzole edilen suşların identifikasyonu için çeşitli biyokimya sal testler yapıldı. Enterohemolizin üretimi, yıkanmış CaCl2 ilaveli koyun kanlı ağarda araştırıldı. Verotoksin tayini Konowalchuk ve ark.(31)'larının önerdiği yöntem baz alınarak yapıldı. Dört gün boyunca gözlenen pleytlerde standart suş 24 saat sonra monolayer hücrelerde % 100 dökülmeye neden olurken, izole ettiğimiz suşlar ancak 48 saat sonra % 75 etkili oldular. 0157 antiserumu ile aglutinasyon veren ancak sorbitol negatif, MUG pozitif üç suş ise 4 gün sonrasında hiç bir dökülmeye neden olmadıklarından VT negatif kabul edildiler. İzole edilen suşların H7 serotiplendirilmesi Farmer ve Davis'in(25) tarif ettikleri yönteme göre yapıldı ve suşlar E.coli 0157:H7 olarak tanımlandı. Ayrıca suşların antibiyotiklere karşı direnç durumları araştırıldı ve kullanılan antibiyotiklerin tümüne duyarlı oldukları saptandı. Anahtar Kelimeler: Enterohemorajik Escherichia coli, Escherichia coli 0157:H7, verotoksin, izolasyon, kıyma. 55

7. SUMMARY In our research, 60 cattle minced beefs and 80 cattle faecal samples (20 samples from calves and 60 samples from cattle) were investigated for the presence of E.coli 0157:H7. E.coli was not isolated from any of the minced beefs, while it was isolated 4 (85) from faecal samples. In this study which was based on cultural methods, modified EC broth (mEC+n) containing novobiocin, CT-SMAC, EMB agar, Fluorocolt E.coli 0157:H7 agar were used. These agar were found insufficient for distinguishing sorbitol negative bacteria from E.coli 0157:H7. However, Fluorocolt E.coli 0157:H7 agar was found successful to evaluate either sorbitol reaction or MUG reaction. Different biochemical tests were performed to identify the isolated strains. The production of enterohemolizin was investigated on the washed sheep blood supplemented with CaCl2. Verotoxin production was searched according to the methods of Konowalchuck's and et. all (31). In the plates which were observed during four days, standard strains affected the verocell about % 100 after 24 hours, while isolated strains affected the verocell about % 75 after 48 hours. Three strains that showed positive results with 0157 antisera and MUG while negative sorbitol reaction, were accepted as VT negative, because they did not effect verocell. H7 serological identification of isolated strains were done according to the method of Farmer & Davis and were identified as E.coli 0157:H7 (25). Besides, antibiotic sensi tivity of the strains was investigated and all of them were found sensitive. Key words: Enterohemorrhagic Escherichia coli, Escherichia coli 0157:H7, Verotoxins, isolation, minced beef. 56