Alfa amilazın insan tükürüğünden saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

ÖZET Alfa Amilazın İnsan Tükürüğünden Saflaştırılması Fizikokimyasal Ve Kinetik Özelliklerinin Araştırılması Bu çalışmada cc-amilaz enzimi insan tükürüğünden izole edilip saflaştınlarak bazı fizikokimyasal ve kinetik özellikleri incelendi. Önce enzimin nişasta substratı için Michaelis-Menten ve Lineweaver Burk grafikleri çizelerek Km değeri hesaplandı. Daha sonra artan enzim miktarının, inkübasyon sıcaklığının, pH'nın, değişen konsantrasyonlarda sodyum florid, disodyum fosfat ve maltozun enzim aktivitesine etkileri araştınldı. Sonuç olarak enzim miktarı arttıkça aktivitenin arttığı insan tükürük cc-amilazı için en uygun inkübasyon sıcaklığının 37°C ve en uygun pH'nın 6-7 olduğu bulundu. Diş macunlarının ve diş tozlarının yapısmda yer alan sodyum florid ve disodyum fosfatm konsantrasyonla ilişkili olarak tükürük a-amilazım inhibe ettiği ve sodyum florid için inhibisyon tipinin non-kompetetif olduğu saptandı. Maltozun da cc- amilazı konsantrasyona bağımlı olarak inhibe ettiği belirlendi. Anahtar Kelimeler : Alfa Amilaz, insan tükürüğü, Purifîkasyon, Enzim kinetiği 49

SUMMARY Purification of the Alpha Amylase from Human Saliva and Evaluation of it's Physicochemical and Kinetic Properties a-amylase was isolated and purified from human saliva and physicochemical and kinetic properties were investigated. Michaelis- Menten and Lineweaver-Burk graphics were plotted and Km value of the enzyme for starch substrate was determined. The effects of enzyme concentration, incubation temperature, pH, NaF, Na2HP04 and maltose on the enzyme activity were investigated. It was found that activity was increased in correlation with increase in enzyme concentration. Optimal incubation temperature was 37°C and optimal pH was 6-7. NaF found in tooth paste and Na2HP04 found in tooth powder inhibited salivary a- amylase correlated with their concentration. The type of inhibition for NaF was non competetive. Maltose also inhibited the activity of ct- amylase dependent to its concentration.