Şap hastalığının serolojik ve virolojik teşhisinde komplement fikzasyon, ELİSA ve floresan antikor tekniklerinin karşılaştırılması

Abstract

62 ÖZET Şap Hastalığının Serolojik ve Virolojik Teşhisinde Komplement Fikzasyon, ELISA ve Floresan Antikor Tekniklerinin Karşılaştırılması Bu çalışmada şap hastalığının serolojik ve virolojik tanısında, Floresan Antikor Tekniği (FAT), Ankara, Şap Enstitüsü'nde rutin olarak uygulanmakta olan, Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) ve Komplement Fikzasyon (CF) testleri ile karşılaştınlmıştır. Çalışmanın ana bölümünü, Oı Manisa ve A22 Mahmatlı şap virus suşlanna karşı elde edilen sığır immunoglobulinlerinin fluorescein isothiocyanate (FITC) ile işaretlenerek hazırlanan konjugatın kullanılmasıyla uygulanan direkt immunofloresan (DIF) testi oluşturmaktadır. Toplam 100 adet sığır dil epiteli, koyun burun swap ve koyun ösofageal-faringeal sıvı materyalleri şap virusu antijenleri yönünden enfekte primer fötal kuzu böbrek (FKB) hücre kültürlerinde incelenmiştir. En erken spesifik yeşil floresan, enfeksiyondan sonraki 3 saat içinde, az sayıda hücrede ve viral antijen hücrelerin sitoplazmasında yerleşmiş şekilde gözlemlenmiştir. Ancak, bu safhada, ışık mikroskopu ile hücrelerin morfolojisinde bir değişiklik görülmemiştir, Gözlenen spesifik floresanın zamanla arttığı ve enfeksiyondan sonraki 8. saatin gözlemleme için en uygun zaman olduğu saptanmıştır. Tüm materyaller, FITC ile işaretlenmiş tavşan anti-sığır immunglobulin kullanılarak uygulanan indirekt immunofloresan (IIF) metodu ile de incelenmiş ve DIF metodu benzer sonuçlar alınmıştır. Bulguların değerlendirilmesi amacıyla DIF ve IIF testleri sandwich ELISA ve CF testleri ile karşılaştırılmış ve uygulanan tüm testlerin benzer spesifite ve sensitivite gösterdiği saptanmıştır. Serolojik tanı için, 150 kan serumu liquid-phase bloking ELISA (LPB-ELISA), indirekt immunofloresan (IIF) ve nötralizasyon immunofloresan (NIF) test ile incelenmiş, her üç testin de benzer duyarlılığa sahip olduğu belirlenmiştir. Sonuç olarak, şap hastalığının tanısında, floresan antikor tekniğinin bir tam yöntemi olarak hızlı ve değerli bir metot olduğu söylenilebilir.Bununla beraber, özellikle serolojik tanı açısından, diğer tekniklerle karşılaştınldığı zaman, LPB-ELISAnın daha pratik, güvenilir ve tercih edilebilir bir test olduğu kanısına varılmıştır. Anahtar Sözcükler: Floresan Antikor Tekniği, ELISA, CFT, şap hastalığının teşhisi

63 SUMMARY A Comparison of Fluorescent Antibody Technique, Complement Fixation Test and Enzyme- linked Immunosorbent Assay in the Virological and Serological Diagnosis of Foot-and-Mouth Disease. In this study Fluorescent Antibody Technique (FAT) was compared with Enzymed-linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Complement Fixation (CF) test which have been used in Foot- and-Mouth Disease Institute, Ankara for the virological and serological diagnosis of FMD. The major part of the study was the DIF test applied using bovine immunoglobulin conjugated with fluorescein isothiocyanate (FITC) against Oı Manisa and A22 Mahmath FMD virus. The FMD virus antigens in a total of 100 cattle tongue epithelium, sheep nasal swabs and sheep oesophageal- pharyngeal fluid samples were examined in the infected primary fetal lamb kidney cell culture. The earliest spesific green fluorescence was seen at 3 hours post infections in the low percentence of cells and the viral antigen was located in the cytoplasm of the cell. Whereas, there was no alteration in the cellular morphology by the light microscope at this stage. It was detected that the spesific fluoresence increased subsequently and 8th hour post infection was the best time for observation. All specimens were also examined by the indirect immunofluorescent test (IIF) using rabbit anti bovine immunoglobulin conjugated with FITC and these results demostrated that DIF and IIF tests were similiar. DIF and IIF tests compared with ELISA and CF test for evaluation of the results and it was detected that all methods were exhibited the similiar spesifity and sensitivity For serological diagnosis, 150 sera blood sera were tested liquid-phase blocking ELISA (LPB- ELISA), indirect immunofluorescence (IIF) and neutralisation immunofluorescence (NIF) tests.These three test were also found to have similiar sensitivity. As a conclusion, it can be mentioned that, FAT would be used in diagnosis of FMD as a fast and valuable diagnostic tool. However, LPB-ELISA was more practical, reliable and preferable test when it compared with the other assays especially in serological diagnosis. Key Words: Fluorescent Antibody Technique (FAT), Enzymed-linked Immunosorbent Assay (ELISA), Complement Fixation (CF) test, diagnosis of FMD.