Doku kültürü vasatlarında kullanınılan sığır kan serumlarında mycoplasma kontaminasyonlarının bakteriyolojilik kültür ve PCR ile karşılaştırılmalı olarak saptanması

Abstract

ÖZET Doku Kültürü Vasatlarında Kullanılan Sığır Kan Serumlarında Mycoplasma Kontaminasyonlarımn Bakteriyolojik Kültür ve PCR ile Karşılaştırmalı Olarak Saptanması Bu çalışmada, sığır kan serumlarında mikoplazma kontaminasyonlarımn saptanması için; bakteriyolojik kültür ve PCR tekniğinin karşılaştırmalı olarak kullanılması, PCR tekniğinin spesifite ve sensitivite değerlerinin belirlenerek mezbaha serumlarında uygulanabilirliğinin araştırılması, kurulu olan ön filtrasyon sisteminin serumlarda mikoplazma kontaminasyonlarını önlemedeki güvenilirliğinin saptanması amaçlandı. Araştırmada, Ankara-Çubuk ve Eskişehir mezbahalarından toplanan 100 adet ham sığır kan serumu K7, EKl-Seitz ve 0,6+0,2 um por çaplı membran filtrelerden süzülerek bakteriyolojik kültür ve PCR ile incelendi. Çalışmada incelenen 100 adet ham sığır kan serumundan 68 (%68)'i bakteriyolojik kültür ile pozitif, PCR ile 4 (% 4)'ü pozitif; K7-Seitz filtresinden süzülen serumların 68 (% 68)'i bakteriyolojik kültür, 10 (% 10)'u PCR ile pozitif; EKl-Seitz filtresinden süzülen serumların 62 (% 62)'si bakteriyolojik kültür, 16 (% 16) 'sı PCR ile pozitif; membran filtreden (0,6+0,2 um) süzülen serumların 38 (% 38)'i bakteriyolojik kültür, 23 (% 23)'ü PCR ile pozitif olarak bulundu. Test sonuçları değerlendirildiğinde; membran filtre sonrasında PCR'm sensitivitesi % 60, spesifitesi % 100, pozitif prediktivitesi 23, negatif predikti vitesi 77 olarak belirlendi. Anahtar Sözcükler: Mycoplasma, Sığır Kan Serumu, PCR, İzolasyon 42

SUMMARY Comperative Detection of Mycoplasma Contamination of Bovine Blood Sera Used in Cell Culture Media by Bacteriological Culture and PCR The aim of this study was to detect mycoplasma contamination in adult bovine sera used in cell culture by bacteriological culture and Polymerase Chain Reaction (PCR) techniques. During the course of the experiments, 100 different raw adult bovine serum samples collected from Ankara-Çubuk and Eskişehir slaughterhauses. First, for the detection of Mycoplasma, the raw serum samples were tested with both techniques. It was observed that 68 per cent of the samples were positive by bacteriological culture, whilst PCR technique revealed only 4 per cent positive samples. During the second phase of this research, detection of Mycoplasma contamination were carried out with filtered serum samples, and the following filtration schemes were used. Single stage with K7-Seitz filter, double stage first with K7-Seitz filter and then EKl-Seitz filter, quadruple stage where the double stage filtration configuration were extended with the inclusion of 0,6 um and 0,2 um pore sized membran filters. Positive Mycoplasma test results of single stage, double stage and quadruble stage filtered serums were; bacteriological culture 68 per cent and PCR 10 per cent, bacteriological culture 62 per cent and PCR 16 per cent, bacteriological culture 38 per cent and PCR 23 per cent, respectively. The evaluation of the sensitivity of PCR technique for bovine sera, sequentially filtered through K7-Seitz, EKl-Seitz, 0,6+0,2 um membrane filters, was found 60 per cent, while the specifity was 100 per cent. Key Words: Mycoplasma, Bovine Blood Sera, PCR, Isolation 43