İnsan olfaktör mukozadan elde edilen nöral kök hücrelerin dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılması

Abstract

Başlık: İnsan olfaktör mukozadan elde edilen nöral kök hücrelerin dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılmasıAmaç: Bu tez çalışmasında, in vitro kök hücre izolasyonu yöntemleri gerçekleştirilerek; insan olfaktör mukozadan (iOM) nöral kök hücrelerin izole edilmesi, çoğaltılması ve karakterizasyon analizlerinin gerçekleştirilerek, belirli nörotrofik faktörlerin etkisi altında in vitro ortamda dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılması amaçlanmıştır.Yöntem: İnsan olfaktör mukozadan nöral kök hücreler (iO-NKH) izole edilip, karakterizasyonları için immunofenotipik ve MTT analizleri gerçekleştirildi. iO-NKH'ler, 3B kültüre edilerek nörosferik yapılar oluşturuldu. Nörosferlerin karakterizasyon analizleri için immunofenotipik ve nöronal farklılaştırma analizleri gerçekleştirildi. Daha sonra iO-NKH'ler in vitro dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırıldı. Farklılaştırma analizi sonrası, dopaminerjik nöron benzeri hücrelerin immunofenotipik ve genotipik karakterizasyon analizleri yapıldı. Bulgular: iOM'den NKH izolasyonu gerçekleştirilerek NKH'lere özgü hücre belirteçlerinin (CD56, CD133, SOX2 ve NESTİN) pozitif ekspresyonları gösterildi. Karakterizasyon analizleri için nöronal ve glial yönde farklılaştırılan nörosferlerin, nöronal ve glial hücrelere özgü hücre belirteçleri (TUBB3, GFAP, NG2) immunofloresan işaretleme ile pozitif olarak gösterildi. İn vitro dopaminerjik nörona farklılaştırılan iO-NKH'lerin dopaminerjik nörona özgü protein (TH) ve gen (Dat, TH, Pitx3, Nurr1) ile karakterizasyonu için immunositokimyasal ve qRT-PCR analizleri gerçekleştirildi. Sonuç olarak dopaminerjik nörona özgü proteinin (TH) pozitifliği ve genlerinin (Dat, TH, Pitx3, Nurr1) ekspresyonunun anlamlı ölçüde arttığı gözlendi.Sonuç: Elde edilen sonuçlara göre, nörodejeneratif hastalıklarda hücre replasman tedavilerinde kullanılabilecek, hücre kültürlerine dayanıklı, nöronal ve glial yönde farklılaşma gösteren, elde edilmesi kolay ve az maliyetli nöral kök hücre kaynağı oluşturulabileceği sonucuna ulaşıldı.

Title: Differentiation of neural stem cells derived from human olfactory mucosa into dopaminergic neuron-like cellsAim: The aim of this thesis was to isolate neural stem cells from human olfactory mucosa (hOM) by performing in vitro stem cell isolation methods and to differentiate the cultured stem cells into dopaminergic neuron-like cells under the influence of certain neurotrophic factors in vitro by performing cultivation, proliferation and characterization analyses.Methods: Neural stem cells (hO-NCs) were isolated from human olfactory mucosa and immunophenotypic and MTT analyses were performed for their characterization. hO-NCs were cultured in 3D to form neurospheres. Immunophenotypic and neuronal differentiation assays were performed for characterization analyses of neurospheres. Then hO-NSCs were differentiated into dopaminergic neuron-like cells in vitro. After differentiation analysis, immunophenotypic and genotypic characterization analyses of dopaminergic neuron-like cells were performed. Results: Results: Isolation of NSCs from hOM was performed and positive expression of NSCs-specific cell markers (CD56, CD133, SOX2 and NESTIN) was demonstrated. For characterization analyses, neurospheres differentiated in neuronal and glial direction were positively expressed with immunofluorescent labeling of neuronal and glial cell-specific cell markers (TUBB3, GFAP, NG2). Immunocytochemical analysis and RT-PCR analysis were performed for the characterization of hO-NSCs differentiated into dopaminergic neurons in vitro with dopaminergic neuron-specific protein (TH) and gene (Dat, TH, Pitx3, Nurr1). As a result, the positivity of dopaminergic neuron-specific protein (TH) and expression of genes (Dat, TH, Pitx3, Nurr1) were significantly increased.Conclusions: According to the results obtained, it was concluded that a resistant to cell culture, neuronal and glial differentiation, easy to obtain and low-cost neural stem cell source that can be used in cell replacement therapies in neurodegenerative diseases can be created.