Technikon RA-1000 otoanalizöründe kullanılan enzimatik reaktiflerin üretilmesi ve dayanıklılıklarının arttırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada, enzimatik plazma glukoz ölçümü İçin reaksiyon şartları optimize edildi. Bu metod, 4-aminoanti- pirin ve para-hidraksi benzoik asit varlığında glukoz oxidaz-peroxidaz enzimatik reaksiyonuna dayanır. Optimum reaktif konsantrasyonları; bir litre için fosfat tampon. 150 mM, pH: 7.0; glukoz oxidaz 12 kü; perok- sidaz 0.5 kü; 4-aminoantipirin İmM; para-hidroksi benzoik asit 25 mM du. Bu reaktif hem two-point kinetik hem de end-point glukoz metodlarmda kullanılabilir. End-point (manuel) metodda düşük örnek -reaktif oranı (1/150) ve 15' reaksiyon süresi kullanılarak test duyarlılığı arttırıldı. Bu reaktif in dayanıklılığını arttırmak için, reak tif i liyof ilize ettik veya sıvı reaktif e, sodyum ez id, etilen glikol, polietileri glikol-6000 ve penisilin- streptomisin gibi koruyucular ilave ettik. Sonuçlar, tek başına sodyum azid (1 gr/L) veya etilen glikolle (%5 V/V) birlikte koruyucu olarak konulduğunda, reaktif in dayanıklılığını en az 40 güne kadar arttırdığını göster mektedir. Bizim koşullarımızda, reaktifin liyof ilizasyonu, glukoz oxidaz aktivitesinde yaklaşık %35 azalmaya neden oldu. Bu kaybolan miktarı liyof ilizasyondan önce ilave etmek gerekeceğinden reaktif maliyeti artacaktır. Bu ne denle koruyucu içeren glukoz reaktifi daha uygun görün- -68-mektedir. Diğer yandan aspartat ve alanin amino tranferaz enzimatik reaktiflerinin liyof ilizasyonu, testlerin kalite sinde herhangi bir değişikliğe neden olmadı. Ayrıca bu liyofilize reaktifler en az 40 gün dayanıklıydı. -69-

SUMMARY In this study, 'we have optimized reaction conditions for enzymic determination of glucose in plasma. This method is based on a coupled enzymatic reaction utilising glucose oxidase and peroxidase in the presence of para-hydroxy benzoic acid and 4-amino ahtipyrine. The initial composition of our optimized reagent, per litre: phosphate buffer 150 mM, pH= 7.0; glucose oxidase 12 kU; peroxidase 0,5 kU; 4-amino antipyrine 1 mM; para- hydroxy benzoic acid 25 mM. The reagent can be used in both two-point kinetic and end-point glucose methods. Test sensitivity was increased by using low sample-reagent ratio (1/150) and 15 minutes reaction time in end-point (manuel) method. To increase stability of the reagent either we lyophilized it or we added some preservatives to liquid reagents such as sodium azide, ethylene glycol, poly ethylene glycol-6000, and penicillin -streptomycine. Our data indicate that sodium azide alone (1 gr/L) or combina tion with ethylene glycol (%5 v/v) as a preservative can increase reagent stability up to eat least 40 days. In our conditions, lyophilization has given rise to approximately 35% decrease in glucose oxidase activity of our reagent. The required amount of glucose oxidase should be added to the reagent before lyophilization in -70-order to compensate for the lost caused by lyophylization, which increases price of reagent. Thus, the liquid glucose reagent containing preservative has been seen more attrac tive to us when the cost has taken into account. On the other hands there were no change in the performance of the tests, when we lyophilizated ALT-AST enzymic reagents. The liyophilized reagents were also stable at least for 40 days. -71-