Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi ile plazma vitamin D3 ölçümü

Abstract

VI.OZET Kan dolaşımındaki 25(OH)D vitamini konsantrasyonu ölçümünün kullanılabilir D vitaminini yansıttığı bilinmekte ve insanlarda D vitamini düzeylerinin en iyi göstergesi olduğu düşünülmektedir. Dolaşımdaki 25(OH)D vitamininin ölçülmesi metabolik kemik hastalıklarının takibinde son derece önemlidir, ayrıca çok sayıda metabolik hastalıkla olan ilişkisi henüz araştırılmaktadır. Bu çalışmanın amacı dolaşımdaki 25(OH)D vitamini miktar tayininde yaygın olarak kullanılan farklı yöntemler olan HPLC-UVD ile radyoaktif I125 işaretli RIA kitlerinden birisinin (BioSource Europe S.A.) sonuçlarını karşılaştırmak ve etkinliklerini araştırmaktı. Çalışma sırasında D vitamini miktar tayininde HPLC yönteminin gün-içi ve günler-arası tekrarlanabilirlik, verim ve deteksiyon sınırları yönünden daha üstün olduğu görüldü. Farklı yöntemlerle saptanmış olan D vitamini miktarlarının karşılaştırma amacıyla kullanılmaması bazı kaynaklar tarafından önerilmişse de, bu çalışmada her iki yöntem arasında matematiksel bir bağıntının bulunduğu belirlenmiştir. Zorunlu hallerde söz konusu bağıntının başarılı bir şekilde kullanılabileceği düşünülmektedir. Özetle, özellikle düşük değerler beklendiği durumlarda HPLC yönteminin kan dolaşımındaki D vitamini düzeyinin belirlenmesinde çok daha etkin olacağı sonucuna ulaşılmıştır. 48

VII. SUMMARY Measurements of circulating 25-hydroxyvitamin D3 [25(OH)D3 vitamin] concentration is considered to be a reflection of availability of vitamin D and is thought to be the best indicator of vitamin D level in human. Measurement of circulating 25(OH)D3 vitamin is important in the management of metabolic bone disease, as well as numerous disorders yet under investigation. Many methods have been developed for determing vitamin D3 status in humans. These techniques are (RIA)Radio Immuno Assays, (ELIA) Enzyme Linked Immunosorbent Assay and, direct UV detection after HPLC The aim of this study was to compare two widely used methods for quantification of circulating 25(OH)D3 vitamin; namely HPLC-based direct ultraviolet detection method, and Radioiodine (125l)-based RIA kits for the detection of 25(OH)D3 vitamin ( BioSource Europe S.A.). At the present study, HPLC method was found to be superior due to better within-run and between-run precisions, recovery, detection limits. Although results of vitamin D levels measured with different methods are not advised to be compared with each other, a mathematical equation was established between the results of these two methods. This equation can effectively be used for comparison of the vitamin D results of the methods, whenever required. Conclusively, HPLC method was found to be easy to use, sensitive, rapid with simple sample preparation, more effective for determination of circulating Vitamin D3 levels, particularly when its level is expected to be at lower ranges, and ease of use make it useful for routine determinations. 49