Tavşanda ozonize kan ile kombine edilmiş greft materyalinin maksiller sinüs lifting uygulamalarındaki etkinliğinin değerlendirilmesi

Abstract

Bu çalışmanın amacı, tavşanda maksiller sinüs lifting uygulamalarında ozonize kan ile kombine edilmiş greft materyalinin kemik iyileşmesi üzerine etkisinin histomorfometrik, immunohistokimyasal ve mikrotomografik açıdan araştırılmasıdır. 28 Yeni Zelanda tavşanı deney (n=14) ve kontrol (n=14) olmak üzere rastgele iki gruba ayrıldı. Deney grubunda her tavşanın kendi kulak veninden alınan 5 ml kan, 80 mikrolitre (µl)/ml konsantrasyonda ozon ile ozonlandı. Greft materyali bu ozonize kan ile kombine edildi. Kontrol grubunda greft serum ile kombine edildi. Genel anestezi altında lokal anestezi desteğiyle sağ maksiler sinüs duvarında elmas rond frezle 5 mm çapında kemik pencere oluşturuldu. Sinüs membranı kaldırılarak elde edilen boşluk 1 cc greft materyali ile dolduruldu. 8. Haftada sakrifiye edilmesi planlanan 1 tavşandan operasyon bölgesinde gelişen yaygın enfeksiyon nedeniyle inceleme için kesit alınamadı.Yeni oluşan kemik ve kemik yoğunluğu görüntü analiz programı kullanılarak ölçüldü. İmmunohistokimyasal incelemede BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2), VEGF (Vascular endothelial growth factor) ve COL-1 (Collagen-1) kullanılarak ölçümler yapılmıştır. Yeni oluşan kemik hacmi ve ogmente edilen toplam hacim mikrotomografi ile volumetrik olarak hesaplanmıştır.Histomorfometrik analiz sonuçlarına göre; yeni oluşan kemik alanı hem deney hem de kontrol grubunda zamanla birlikte artış gösterse de gruplar arasında yapılan çoklu karşılaştırma sonuçlarına göre yeni oluşan kemik alanı açısından yalnızca O8 ve O4 grupları arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık görülmüştür (p=0,037), yeni oluşan kemik yoğunluğu açısından yine hem deney hem de kontrol grubunda zamanla birlikte artış göstermekle beraber O-8 grubu O-4 ve K-4 gruplarıyla karşılaştırıldığında (sırasıyla p= 0,007 ve 0,004) ve K-8 grubu K-4 grubuyla karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar elde edilmiştir (p= 0,023). İmmunohistokimyasal analizlerin sonuçlarına göre; Anti BMP-2 ile boyanan alan yüzdesi deney grubunda zamanla birlikte artış gösterse de kontrol grubunda zamanla birlikte azalma göstermiştir, çoklu karşılaştırma sonuçlarına göre gruplar arasında anlamlı bir farklılık tespit edilememiştir, anti VEGF ile boyanan damar sayısı tüm gruplarda zamanla birlikte artış göstermiştir ve O-8 grubu O-4 ve K-4 grupları ile karşılaştırıldığında (sırasıyla p=0,000, p=0,000), O-4 grubu O-8 ve K-8 grupları ile karşılaştırıldığında (sırasıyla p=0,000, p=0,000) ve K-8 grubu K-4 grupları ile karşılaştırıldığında (0,000) anlamlı sonuçlar elde edilmiştir, anti COL-1 ile boyanan alan yüzdesi tüm gruplarda zamanla birlikte artış gösterse de çoklu karşılaştırma sonuçlarına göre anlamlı bir fark tespit edilememiştir. Mikrotomografik inceleme sonuçlarına göre hem kontrol hem de deney grubunda yeni oluşan kemik hacminin ogmente edilen total hacme oranı zamanla birlikte düşüş göstermiştir. Bu çalışmanın sonuçları değerlendirildiğinde, tavşanlarda uygulanan maksiler sinüs lifting işlemleri sırasında kullanılan greft materyali ozonize kan ile kombine edildiğinde yeni oluşan kemik yoğunluğu ve yeni damar sayısında artış sağlamış olmakla birlikte greft ile beraber ozonun uygulamasının farklı yöntem, doz ve süreleriyle yapılacak daha ileri çalışmalara ihtiyaç olduğunu düşünmekteyiz.

The aim of this study is to investigate the effect of the graft material combined with the ozonized blood on bone healing in rabbit in maxillary sinus lifting applications histomorphometrically, immunohistochemically and microtomographically. 28 New Zealand rabbit were randomly divided into 2 groups as experimental (n=14) and control (n=14). In experimental group, 5 ml blood obtained from the ear vein of each rabbit was ozonized by 80 mikroliters (µl)/ml concentration ozone-oxygen mixture. Graft material was combined with this ozonized blood. In control group, the graft was combined with saline solution at 0.9% concentration. A 5 mm diameter window was created on right maxillary sinus window in each rabbit under general anesthesia by local anesthesia support. Sinus membrane was elevated and the space was augmented by 1 cc graft material. We could not include 1 rabbit from the control group which was planned to sacrify at the end of the 8 week because of the extensive inflammation at the operation site.Newly formed bone area and bone density were measured using by image analysis program. Bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), Vasculer endotelial growth factor (VEGF) and collagen-1 (COL-1) analyses were carried out immunohistochemically. The amount of the newly generated bone and the amount of the total augmented space were calculated volumetrically by microtomography.According to histomorphometrical analysis, although newly formed bone area has increased in both experimental and control group with time the only increase in O8 group compared to O4 group was statistically significant (p=0,037). The increase in new bone density was seen in both experimental and control groups with time and the increase in new bone density in O-8 group compared to O-4 and K-4 groups (p=0,007 and p=0,004 respectively) and in K-8 group compared to K-4 group (p=0,023) was statistically significant.According to immunohistochemical analysis; although the intensity and the severity of field staining with anti BMP-2 has increased in experimental group conversely it has decreased in control group with time and there was no statistically significance among all groups compared to each other, the number of new vessels stained with anti VEGF has increased in both experimental and control group with time and the number of new vessels stained with anti VEGF in O-8 group compared with O-4 and K-4 (p=0,000, p=0,000 respectively) in O-4 group compared with O-8 and K-8 (p=0,000, p=0,000 respectively) and in K-8 group compared with K-4 (p=0,000) was statistically significant, although the intensity and the severity of field staining with anti COL-1 has increased in both experimental and control group with time there was no statistically significance among all groups compared to each other.According to microtomographical analysis the percentage of the volume of the newly generated bone in the total augmented space volume has decreased with time in both experimental and control groups.Considering the results of this study, the graft material combined with the ozonized blood increased the density of the newly generated bone and the number of the new vessels in maxillary sinus applications in rabbit. In addition we suggest further studies should be done combining the graft with ozone by different methods, dosages and exposure times.