Avidin-biotin sistemi konjugat kinetiğinin incelenmesi ve tanı yöntemlerinde bir model geliştirilmesi

Abstract

ÖZET Immunoassaylerde ve diğer bioanalitik aplikasyonlarda kul lanılan avidin-biotin tekniğinin prensibi, biotin konjuge mater yal ile avidin veya herhangi bir sinyal verici materyal ile kova- lent bağlanarak, haz ir lanmış avidin konjugatları arasındaki reak siyona dayanır. Bu çalışmada, anti-T^ IgG nin biotinlenmesi başarılmış ve bu biotin içeren IgG, thyroxine (T^) nin ölçümü için geliştirilen test sisteminde kullanılmıştır. Bu çalışmanın esas amacı anti-T^ IgG nin biotinlenmesidir. Daha sonra, biotinlenme derecesi ve bu biotinlenmiş reaktifin bir test sisteminde kullanılabilirliği de nenmiştir. Bu çalışmada hazırlanan biotinlenmiş materyal, avidin- biotin içeren T4. için geliştirilmiş olan bir enzim immunoassay- de kullanılmıştır. Bu sistem, katı faz yarışmalı bir sistem olup avidin kaplı tüpler, biotinlenmiş anti-T^ IgG ve peroksidaz işa retli Ti* içermektedir. Yapılan geçerlilik testlerinden anlaşıldığı gibi bu yön tem RIA kadar güzel perfomansa sahiptir. -43-

S ü fi M A R Y The principle of the avidin-biotin technigue, which is used in immunoassays and other bioanalytic applications depends on the reaction betveen biotin conjugated material and avidin ör avidin conjugates prepared by covalent coupling of avidin with any signal producing material. in this study, biotinylation of anti-T^ IgG was achieved and this biotin-containing IgG was used in the test system deve- loped för the detection of thyroxine (T^). The main purpose with this study was the biotinylation of the anti-T^ IgG. After that the degree of biotinylation and the usage of this reagent in the test system was tested. The biotinylated material prepared by this study was properly used in the avidin-biotin containing enzyme immunoassay developed for the T^. The system was solid- phase competitive enzyme immunoassay in wich avidin coated tubes and biotinylated anti-T4 IgG and peroxidase labelled Tİ,. were used. The validation results indicate that this method has as good performance characteristics as RIA. -44-