Serum lesitin kolesterol açil transferaz aktivitesinin ölçümü ve klinik uygulamaları

Abstract

VI- ÖZET Lesitin: kolesterol acil transferaz (LCAT), insan serumunda bulunan kolesterol esterlerinin çoğunluğunun oluşumundan sorumlu ve ters kolesterol taşınımında önemli bir enzimidir. Bu çalışmada, LCAT ölçümü için bir yöntemin optimizasyonu yapıldı ve egzersiz ile sigaranın LCAT aktivitesine olan etkisi araştırıldı. İlk önce, çalışma için gerekli apo A-l banka serumlarından izole edildi. Daha sonra, LCAT ölçümü için seçilen yöntemdeki reaksiyon koşulları tek tek incelenerek optimum reaksiyon konsantrasyonları belirlendi. Üçüncü olarak, egzersiz ve sigaranın LCAT aktivitesine etkisini araştırmak amacıyla, normolipemik, sigara içmeyen 29 ve sigara içen 36 (en az 1 paket/gün) genç erkeğin serumlarında, 6 haftalık askeri eğitim öncesi ve sonrasında LCAT aktivitesi, trigliserid, total kolesterol, HDL-C ve HDL3-C ölçüldü. LCAT aktivitesi, [14C]-kolesterol taşıyan rekombinant HDL'nin, serum örnekleriyle inkübasyonu sonucu oluşan kolesterol ester miktarı, ince tabaka kromatografisi ve otoradyografi kullanılarak belirlendi. Total kolesterol ve trigliserid, enzimatik-kolorimetrik yöntemlerle çalışıldı. HDL-C ve HDL3-C belirlenmesinde, dextran sülfat-MgCI2 çöktürme yöntemleri kullanıldı. Egzersiz öncesi, sigara içen grubun LCAT aktivitesi, sigara içmeyen gruba göre anlamlı olarak düşüktü (p<0.05). Fakat, trigliserid, kolesterol, LDL-C, HDL-C, HDL2-C ve HDL3-C anlamlı farklılığa sahip değildi. Egzersiz sonrasında, her iki grubun trigliserid, kolesterol ve HDL3-C düzeylerinde anlamlı farklılık olmamasına karşın, sigara içmeyen grubun serum LCAT, HDL-C ve HDL2-C düzeyleri anlamlı olarak yüksek (Sırasıyla; p<0.001, p<0.05, p<0.05), LDL-C düzeyleri anlamlı olarak düşüktü (p<0.05). Gruplar kendi içinde değerlendirildiğinde, egzersiz sonrasında, öncesine göre, sigara içmeyen grubun LCAT, HDL-C ve HDL2-C'ünde anlamlı artışlar (Sırasıyla; p<0.001, p<0.001, p<0.05), LDL-C düzeylerinde anlamlı düşüş (p<0.05) belirlendi. Sigara içen grupta, belirlenen değişikliklerin anlamlılığı yoktu. Sonuçlar, düzenli egzersizin LCAT, HDL-C ve HDL2-C düzeyleri üzerinde olumlu etki yaptığını, ancak kronik sigara içiminin bu etkiyi önleyebileceğini göstermektedir. 43

VII- SUMMARY Lecithin:cholesterol acyltransferase (LCAT) is the enzyme that is responsible for the formation of most of cholesteryl esters in human serum. In this study, the optimization of a method for LCAT activity measurement, and investigating the effects of exercise and smoking on serum LCAT activity were aimed. First, apo A-l used in this work was isolated from bank sera. Second, the optimum reaction concentrations were determined by evaluating the reaction conditions in the chosen method for LCAT activity. Third, for investigation of the effects of exercise and smoking on serum LCAT activity, serum triglyceride, total cholesterol, HDL-C, HDL3-C and LCAT activity were measured in the sera of 29 nonsmoking and 36 smoking (at least, 1 packet/day) young men before and after 6-week military training. LCAT activity was determined by measuring the amount of cholesteryl esters produced in the incubation of serum and recombinant HDL including [14C]- cholesterol. Triglyceride and cholesterol were measured with enzymatic- colorimetric methods. The determinations of HDL-C and HDL3-C were done by the methods of dextran sulphate-MgCI2 precipitation. Before exercise, serum LCAT activity in smoking group was significantly lower than that of nonsmoking group (p<0.05). But, there were no any significant differences between triglyceride, total cholesterol, LDL-C, HDL-C, HDL2-C and HDL3-C of both groups. After exercise, LCAT, HDL-C and HDL2-C of nonsmoking group were significantly higher than those of smoking group (p<0.001; p<0.05; p<0.05, respectively) and LDL-C was significantly lower in nonsmoking group (p<0.05), although triglyceride, total cholesterol and HDL3-C did not show any significant differences between two groups. When data is compared with before and after exercise within each group; LCAT, HDL-C and HDL2-C showed significant increase (p<0.001; p<0.001 p<0.05, respectively), and LDL-C showed significant decrease (p<0.05) in only nonsmoking group. There were no significant of differences in smoking group. The results indicate that regular exercise has some positive effects on LCAT, HDL2-C and LDL, and chronic smoking may obscure these effects. 44