Yanıkta doku kültürünün avantajları

Abstract

ÖZET 2 - 4 cm 2' lik deri biyopsisinin epidermisi tripsin + EDTA solüsyonu içerisinde +4 derecede 18 saat inkübe edilerek dermişten ayrıldı. Elde edilen epidermal hücreler proliferasyon yeteneği mitomisin - C ile durdurulan 3T3 fare fibroblastlan ile birlikte, 75 cm 2' lik polistren flasklarda kültüre edildi. Bazal vasat olarak HAM F12 + DMEM ( 1:1 ) kullanıldı. Bazal vasata fetal sığır serumu, L - glutamin, adenin, insülin, hidrokortizon, transferrin, 3,37,5 - triiyodo - L - tironin eklendi. Kültürler 37 ° C ve % 5 CO 2' li etüvde inkübe edildi ve haftada üç kez vasat değiştirildi. Kültürün ikinci gününden itibarin vasata kolera toksini ve epidermal büyüme faktörü de eklendi. 8-10 gün sonra kültür % 80 konfluent oldu ve subkültürler yapıldı. Sekonder kültürler 10 günde konfluent hale gelip stratifiye oldular. Flasklar kızgın tel yardımı ile açıldı. Kültüre epitel flask zemininden dispaz ile muamele edilerek bir tabaka halinde ayrıldı. Epitel üzerine parafin emdirilmiş gazlı bez metal küplerle monte edildi ve bazal taraf üstte olacak şekilde transport kabma aktarıldı. Sonuçta birkaç santimetre karelik bir deri örneğinden elde edilen keratinositlerin invitro ve seri kültürü ile büyük miktarlarda, greftlenebilir kalitede epitel elde edildi. 46

SUMMARY The epidermis of the cutaneous biopsy ( 2 - 4 cm 2 ) was separated from dermis after incubation with trypsin + EDTA solution at +4 ° C for 18 hours. Epidermal cells were cocultured with 3T3 murine fibroblasts whose proliferation was arrested by mitomycin - C in 75 cm polystrain flasks. HAM F12 + DMEM ( 1:1 ) was used as a basal medium. Supplements were fetal bovine serum, L - glutamine, adenin, insulin, hydrocortisone, transferrin, 3,37,5 - triiodo - L thyronine. The cultures were incubated at 37 ° C in humidifed athmosphere containing 5 % CO 2 and medium was changed three times weekly. After two days in culture cholera toxin and epidermal growth factor were added to the medium. The cultures were nearly confluent after 8-10 days and subcultured. The secondary cultures became confluent and stratified within 10 days. Flasks were opened by means of a hot wire. Cultured epithelia were enzymatically detached as a coherent sheet from the culture using dispase treatment. Paraffin impregnated tulle gras was mounted on epithelium with metal clips and transferred to transport vessel together basal side up. As a conclusion, large amounts of graftable epithelia were generated using in vitro and serially culture of keratinocytes obtained from a piece of skin sample. 47