Deneysel nekrotizan enterokolit modelinde selektif ve nonselektif nitrik oksit sentaz enzm (E.C.1.14.13.39.) inhibitörlerinin intestinal hasara etkisi

Abstract

6. ÖZET Bu çalışmada NEK modeli üzerinde selektif ve nonselektif İNOS inhibitörlerinin etkisi araştırılmıştır. AG selektif, LNAME ise nonselektif İNOS inhibitörü olarak kullanıldı. Deneysel NEK oluşturmak için yenidoğan ratlar formül mama karışımı ile beslendi. Doğan ratlar 4 gruba ayrıldı. 1. grup kontrol olarak belirlendi, anne ratın yanında bırakılarak anne sütü ile beslenmeleri sağlandı. 2. grup (NEK grubu), hiç anne sütü almadan anne ratın yanından alınarak formül mama karışımı ile beslendi. 3. grup (Aminoguanidine grubu), yine formül mama karışımı ile beslendi, ek olarak 0,1 mi %0,9 NaCI içinde 10 mg/kg/gün Aminoguanidine HCI verildi. 4. grup (LNAME grubu), anne rati yanından alınan yenidoğan ratlara formül mamaya ek olarak 0,1 mi %0,9 NaCI içinde 10mg/kg/gün LNAME verildi. Denekler 4. gün öldürülerek ileoçekal valvin 1 cm proksimalinden yaklaşık 10 cm lik kısım ölçümler için cam tüplere alındı. Değerlendirme kriterleri olarak ağırlık değişimi, sağ kalım oranları, makroskopi, Nitrit+Nitrat değerleri, MPO, IL-6, TNF-a seviyeleri incelendi. Ağırlık değişimi açısından kontrol grubu ile diğerleri arasında anlamlı fark mevcut iken NEK, Aminoguanidine, LNAME grupları arasında fark yoktu. Sağ kalım oranları LNAME grubunda, mortalite fazla, NEK, Aminoguanidine, kontrol grupları arasında fark bulunamadı. Makroskopik incelemede kontrol grubunda tüm barsaklar normaldi, NEK 4, Aminoguanidine grubunda 2, LNAME grubunda 5 ratın barsaklarında mavi-siyah renk değişimi ve nekroz görüldü. NO üretimi (Nitrit+Nitrat seviyesi) NEK grubunda kontrollere göre anlamlı olarak yüksek bulundu. Aminoguanidine ve LNAME gruplarında ise NO üretiminin azaldığı saptandı. MPO seviyelerinde ise, AG grubu, NEK grubuna göre belirgin düşüktü. IL-6 seviyelerinde ise, AG grubu, NEK ve LNAME grupları ile karşılaştırıldığında belirgin düşüktü. TNF-a seviyeleri de, istatistiksel olarak anlamlı olmasada, AG grubunda, NEK ve LNAME grubuna göre düşüktü. Sonuç olarak Aminoguanidine NEK modelinde İNOS indüksiyonunu azaltarak intestinal hasan azaltmıştır. LNAME, İNOS ve cNOS inhibisyonu ile NO 37üretimini azaltmış, ancak lokal intestinal hasarda bir değişiklik göstermemiş, mortaliteyi ise artırmıştır. Buna göre iNOS indüksiyonu NEK'li barsakta hasan artırırken, cNOS barsaklar için koruyucu ve normal fizyolojiden sorumlu NO üretimini sağlamaktadır. 38

7. SUMMARY EFFECTS OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE INHIBITION ON INTESTINAL DAMAGE IN RATS WITH EXPERIMENTAL NECROTIZING ENTEROCOLITIS: To study the importance of iNOS on the pathogenesis of NEC, the effects of selective (aminoguanidine, AG) and nonselective (l-nitroarginine methyl ester, I- NAME) iNOS inhibitors on intestinal morphologic changes were assessed in neonatal rats with experimental NEC. Immediately after birth, the neonatal rats were randomized into one of four treatment groups. Group 1 (control group) consisted of rats that were breast-fed. Group 2 (NEC group) consisted of neonates separated from their mothers, were gavaged with a special rodent formula thrice daily, group 3 (AG), and group 4(l- NAME) were treated in a similar fashion to those in group 2, additionally they were gavaged with 0.1 ml/day 0.9% saline alone, 10mg/kg/day AG in 0.1 ml saline, and 10 mg/kg/day l-NAME in 0.1 ml saline, respectively. The rats were sacrificed on day 4, and the last 10 cm of terminal ileum was harvested for detection of assays in tissue. Weight changes, survive ratio, macrocopy, nitrite and nitrate levels, MPO, IL-6, TNF-a levels were taken as determinative criterias. There was a significant difference between control and other groupsin weight changing, although, there was no difference between NEC,AG,LNAME. Mortality showed an increase in LNAME group. The macroscopic signs were normal in control's bowels. Both necrosis and changed colors from blue to dark were seen in 4 rats of NEC, 2 rats of AG, 5 rats of LNAME groups. NO( nitrite and nitrate) levels were higher in NEC group than control, on the other hand, NO levels showed decrease in AG and LNAME groups compared to NEC. MPO levels were lower in AG group than NEC group. IL-6 levels were significantly lower in AG group than NEC and LNAME groups. Also, TNF-a levels were lower in AG group than those LNAME and NEC, but this wasn't significant. 39AG significantly reduced both induction of iNOS activity and intestinal damage, which suggests that NO synthesized by iNOS, plays an important pathogenic role in formula-fed induced NEC. L-NAME did not change the severity of damage and increased mortality, raising the possibility, considering with the effect of AG, that the NO synthesized by constitutive NOS acts to conserve the physiologic functions of intestine. 40