Yoğun bakım ünitesinde yatan hastaların idrarlarından izole edilen candida türlerinin moleküler epidemiyolojisi ve antifungal duyarlılıkları

Abstract

Amaç: Selçuk Üniversitesi Meram Tıp Fakültesi Hastanesi yoğun bakım ünitesinde yatan hastaların idrar kültürlerinden izole edilen C. albicans, C. glabrata, C.tropicalis suşlarının moleküler epidemiyolojik analizi, amfoterisin B ve flukonazole karşı antifungal duyarlılıklarının saptanması amaçlanmıştır.Gereç-yöntem: Candida izolatlarının identifikasyonu germ tüp testi, cornmeal agar besiyerindeki mikroskopik morfoloji (klamidospor, blastospor, artrospor, yalancı hif ve gerçek hif) ve karbonhidrat asimilasyon testleri (API ID 32C -BioMérieux, France) kullanılarak yapıldı. Suşların amfoterisin B ve flukonazole karşı antifungal duyarlılığı CLSI kriterlerine göre mikrodilüsyon yöntemi ile araştırıldı. Suşlar arasındaki klonal ilişkiyi araştırmak için Cnd3 primeri kullanılarak RAPD analizi uygulandı.Bulgular: Amfoterisin B için 56 Candida suşunun mikrodilüsyon yöntemi ile MİK aralıkları, MİK50 ve MİK90 değerleri sırasıyla, C. albicans'da 0.125-1µg/ml, 0.125 ve 0.5µg/ml, C.tropicalis'te 0.125-1µg/ml, 0.25 ve 1µg/ml, C.glabrata'da 0.125-1µg/ml, 0.25 ve1µg/ml olarak bulundu. Flukonazol için MİK aralıkları, MİK50 ve MİK90 değerleri sırasıyla; C.albicans'ta 0.25-4µg/ml, 0.25 ve 0.5µg/ml, C.tropicalis'te 0.25-16µg/ml, 0.5 ve 1µg/ml, C.glabrata'da 0. 5-64µg/ml, 8 ve 16µg/ml olarak saptandı. RAPD analizi sonuçlarına göre; C.albicans için iki, C.tropicalis ve C.glabrata için bir ana patern varlığı tespit edildi.Sonuç: İzolatların hiçbiri amfoterisin B için yüksek (MİK>1µg/ml) MİK değerlerine sahip değildi. Bir C.glabrata izolatı flukonazole dirençli (MİK?64µg/ml) iken bir C.tropicalis ve iki C.glabrata izolatı doz bağımlı duyarlı (MİK 16-32µg/ml) idi. RAPD analizi sonuçları C.albicans için iki klondan, C.glabrata ve C.tropicalis için ise tek bir klondan ekzojen yayılım olduğunu göstermektedir. Hastalardan alınan örneklerin ve çevresel örneklerin birlikte epidemiyolojik analizi yapılarak ekzojen odağın tespit edildiği daha ileri çalışmalar yapılmalıdır.

Objective: In this study it is aimed to investigate the molecular epidemiological analysis and antifungal sensitivity for amphotericin B and fluconazole of Candida albicans, Candida tropicalis and Candida glabrata isolated in the urine of patients hospitalized in the intensive care unit of Selcuk University Meram Medical School Hospital, Konya/Turkey.Methods: Identification of Candida isolates was performed by investigating germ tube formation, microscopic morphology (chlamydospor, blastospor, pseudohyphae and true hyphae) on corn meal agar and carbohydrate assimilation patterns (API ID 32C -BioMérieux, France). Antifungal sensitivities of the isolates to amphotericin B and fluconazole were determined by in vitro broth microdilution method following the recommendations of CLSI. To investigate the clonal relationship of the isolates Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) analysis was performed by using the primer Cnd3.Results: Of the 56 Candida isolates MIC ranges, MIC50 and MIC90 values against amphotericin B were 0.125-1µg/ml, 0.125 and 0.5µg/ml for C.albicans, 0.125-1µg/ml, 0.25 and 1µg/ml for C.tropicalis and 0.125-1µg/ml, 0.25 and1µg/ml for C.glabrata, respectively. Against fluconazole; MIC ranges, MIC50 and MIC90 values were 0.25-4µg/ml, 0.25 and 0.5µg/ml for C.albicans, 0.25-16µg/ml, 0.5 and 1µg/ml for C.tropicalis and 0.5-64µg/ml, 8 and 16µg/ml for C.glabrata, respectively. According to the results of RAPD analysis two patterns were identified for C.albicans and one pattern for C.tropicalis and one pattern for C.glabrata.Conclusion: For amphotericin B non of the isolates had high (MIC >1µg/ml) MIC values. While one of the Candida glabrata isolate was resistant to fluconasole (MIC ?64µg/ml) one C.tropicalis and two C.glabrata isolates were susceptible-dose-dependent (MIC 16-32µg/ml). The results of RAPD analysis indicated an exogenous spread from two clones for C.albicans, one clone for C. glabrata and one clone for C.tropicalis. Further studies are needed to determine the exogenous reservoirs.