Metronidazol, mikonazol ve lidokain' in farmasötik preparattan aynı anda analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) yönteminin geliştirilmesi

Abstract

Bu tez kapsamında, Candida albicans'ın oluşturduğu kandidal vulvovajinit, Gardnerella vaginalis ve anaerob bakterilerin oluşturduğu bakteriyel vajinoz ve Trichomonas vaginalis'in oluşturduğu trikomonal vajinit ile karma vajinal enfeksiyonların tedavisinde kullanılan Metronidazol, Mikonazol ve Lidokain etken maddelerini içeren farmasötik preparattan aynı anda analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile analiz yöntemi geliştirme ve validasyonu çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Analiz yönteminde, sabit faz olarak, ACE C18 250 x 4.6 mm 5 µm kolon tercih edilmiş olup, hareketli faz olarak tercih edilen 35 mM amonyum asetat ve metanol gradient sistemi ile 1.3 mL/dk akış hızında analitler elue edilmiştir. Ultraviyole detektörde 230 nm dalga boyunda gerçekleştirilen çalışmada Metronidazol, Lidokain, Mikonazol alıkonma zamanları sırasıyla 3.3 dk, 12.1 dk ve 17.3 dk'dır. Geliştirilen yöntemler ICH Q2(R1) analitik yöntem validasyon parametreleri baz alınarak gerçekleştirilmiş olup, kararlılık, özgünlük, doğrusallık, doğruluk, geri kazanım, gözlenebilme sınırı (LOD), tayin alt sınırı (LOQ), kesinlik, tekrarlanabilirlik, sağlamlık, tutarlılık parametreleri esas alınmıştır. Doğrusallık aralıkları, Metronidazol için 75 µg/mL – 1125 µg/mL, Lidokain HCl için 10 µg/mL – 150 µg/mL, Mikonazol nitrat için 20 µg/mL – 300 µg/mL olarak bulunmuştur. Gözlenebilme sınırları, Metronidazol için 0.39 µg/mL, Lidokain HCl için 1.72 µg/mL, Mikonazol nitrat için 0.82 µg/mL ölçülürken, alt tayin sınırı, Metronidazol için 1.17 µg/mL, Lidokain HCl için 5.21 µg/mL, Mikonazol nitrat için 2.47 µg/mL olarak tespit edilmiştir. Geliştirilen yöntemin validasyon çalışmaları sonuçları neticesinde, doğru, kesin, özgün, duyarlı, tutarlı ve sağlam olduğu ispatlanmıştır. Valide edilen yöntem ile piyasadan temin edilen, her üç etken maddeyi içeren farmasötik preparat analiz edilmiş ve birim dozda olması gereken etken madde miktarının güvenirliliği kanıtlanmıştır.

In this thesis, high performance liquid chromatography (HPLC) for simultaneous analysis of the pharmaceutical product containing Metronidazole, Miconazole and Lidocaine active ingredients used in the treatment of candidal vulvovaginitis caused by Candida albicans, bacterial vaginosis caused by Gardnerella vaginalis and anaerobic bacteria, and trichomonal vaginitis caused by Trichomonas vaginalis and mixed vaginal infections, method development and validation studies were carried out with. In the analysis method, ACE C18 250 x 4.6-5µm column was preferred as the stationary phase, and the analytes were eluted with the 35 mM Ammonium Acetate and Methanol gradient system preferred as the mobile phase at a flow rate of 1.3mL/min. İn the study 230 nm wavelength was carried out at with the ultraviolet detector. Metronidazole, Lidocaine, Miconazole, retention times are 3.3 min, 12.1 min and 17.3 min, respectively. The developed methods were based on ICH Q2 (R1) analytical method validation parameters, which are stability, specificity, linearity, accuracy, recovery, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), precision, repeatability, robustness, ruggedness parameters. Linearity ranges for all three substances were found as 75 µg/mL – 1125 µg/mL for Metronidazole, 10 µg/mL – 150 µg/mL for Lidocaine HCl, 20 µg/mL – 300 µg/mL for Miconazole nitrate. Limit of detection (LOD) were calculated as 0.39 µg/mL for Metronidazole, 1.72 µg/mL for Lidocaine HCl, 0.82 µg/mL for Miconazole nitrate, while the limit of quantification (LOQ) was detected that 1.17 µg/mL for Metronidazole, 5.21 µg/mL for Lidocaine HCl, and 2.47 µg/mL for Miconazole nitrate. As a result of the validation studies for developed method, it has been found to be accurate, precise, original, sensitive, consistent and robust. With the validated method, the pharmaceutical product containing all three active substances obtained from the market was analyzed and the reliability of the amount of active substance required in a unit dose was proven.