Veratrum album bitkisinden saflaştırılan jervin'in varikosel oluşturulan rat modelinde testis dokusunda meydana gelen değişimler üzerindeki etkisinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada varikosel rat modelinde veratrum album bitkisinden izole edilenjervin'in testis dokusu üzerindeki etkilerinin histolojik, immunohistokimyasal,biyokimyasal ve moleküler yöntemler kullanılarak incelenmesi amaçlanmıştır.Deney hayvanı olarak 8 haftalık Sprague Dawley cinsi, ortalama ağırlıkları180-200 g olan 40 adet erkek rat kullandı. Deney hayvanları rastgele 6 gruba ayrıldı;kontrol, sham, sağlıklı+jervin (10 mg/kg), varikosel, varikosel+jervin (5 mg/kg),varikosel+jervin (10 mg/kg)'dır. Hayvanlarda varikosel rat modeli oluşturuldu ve sudaçözdürülmüş jervin 4 hafta boyunca jervin gruplarındaki deney hayvanlarına gavajyoluyla verildi. Sol testis disseke edilip, eksize edildikten sonra histolojik,biyokimyasal ve Real Time-PCR incelemeler için dokular alındı. Alınan dokular üçparçaya ayrıldı. Her bir dokunun bir parçası histolojik incelemeler için % 10'lukformaline alındı. Biyokimyasal ve Real Time-PCR çalışmaları için ayrılan dokuparçaları -80 °C saklandı.Gruplar arasında yapılan karşılaştırmalarda canlı ve testis ağırlıklarıbakımından bir fark tespit edilmedi. Kontrol, sham ve sağlıklı+jervin (10 mg/kg)gruplarında seminifer tübül yapısı normal görünümdeyken varikosel grubu vevarikosel jervin gruplarında seminifer tübül yapılarında bozulmalar olduğu gözlendi.Kontrol, sham ve sağlıklı+jervin (10 mg/kg) gruplarında intersitisiyel alanda bulunankan damalarının duvarında güçlü PAS pozitif reaksiyon gözlenirken, Leydighücrelerinin sitoplazmalarında zayıf PAS pozitif reaksiyon gözlendi. Varikosel+jervin(10mg/kg) grubunda peritübüler interstisyel alanda, bazal membranda vespermatogenez aşamasındaki germ hücrelerinde PAS reaksiyonu kontrol grubunabenzer düzeydeydi. Masson trikrome boyamada varikosel grubunda kan damarlarıduvarında, tunika albugineada ve seminifer tübül duvarında kolajenin diğer gruplaragöre arttığı görüldü. Gruplar arasında sperm morfometrik ölçüm sonuçları benzerkensperm baş ve kuyruk anomalileri bakımından farklılık olduğu görüldü.TNF-α immunoreaktivitesinin varikosel grubunda daha güçlü olduğu görüldü.Biyokimyasal olarak varikosel grubunda kontrol grubuna göre SOD enzimaktivitesinin düşük CAT enzim aktivitesinin yüksek olduğu görüldü. Gruplar arasındaReal Time-PCR bulgularına göre hem TNF-α hem de p53 ekspresyon seviyelerindeanlamlı fark tespit edildi. Jervinin varikoselde sperm anormalitesi üzerindekiiyileştirici etkisi, testis dokusundaki antiinflamatuvar ve antioksidan düzenleyicietkileri bulunmakla birlikte p53 üzerindeki inhibe edici etkiye sahip olduğu tespitedildi. Jervinin, varikoselden kaynaklı sperm anormalitesi üzerinde iyileştirici biretkiye, testis dokusunda ise antiinflamatuvar ve antioksidan düzenleyici etkilere sahipolduğu tespit edildi.Anahtar Kelimeler: Jervin, p53, Testes, TNF-α, Varicocele,

In this study, it was aimed to investigate the effects of jervin, which wasisolated from Veratrum album, on testicular tissue obtained from induced varicocelerats by using histological, immunohistochemical, biochemical and moleculartechniques.In this experimental study, 40 male Sprague Dawley rats of 8-week-old withan average weight of 180-200 g were used. Animals were randomly divided into 6groups; control, sham, healthy+jervin (10 mg/kg), varicocele, varicocele+jervin (5mg/kg) and varicocele+jervin (10 mg/kg). In varicocele groups varicocele wassurgically induced. Then jervin dissolved in water and this solution was given toanimals in the jervin groups via gavage for 4 weeks. After the left testes were dissectedand excised, tissues were divided into three parts for histological, biochemical andReal Time-PCR examinations. A piece of each tissue was taken into %10 formalin forhistological examintion. The other tissue pieces for biochemical and Real Time-PCRstudies were stored at -80 °C. No difference was found in terms of body weight andtesticular weights among groups. It was observed that seminiferous tubules werenormal in the control, sham and healthy+jervin (10 mg/kg) groups but it was foundthat seminiferous tubules were destroyed in the varicocele and varicocele+jervingroups. In the wall of blood vessels in the interstitial tissue of testis in the control,sham and healthy+jervin (10 mg/kg) groups was observed a strong PAS reaction,while a weak PAS reaction was observed in the cytoplasm of Leydig cells. PASreaction in the interstitial area, basement membrane and germinal epithelium in thevarikosel+jervin (10mg/kg) group was similar to that of the control group. In Massontrichrome staining, collagen amount increased in the wall of the blood vessels, tunicaalbuginea and basement membrane of seminiferous tubules in varicocele groupcompared to other groups. Morphometric results of sperm were similar among groupsbut there was a difference among groups in terms of head and tail anomalies in sperms.TNF-α immunoreactivity was stronger in the varicocele group than that ofothers. It was found that SOD activity was decreased and CAT activity was increasedin varicocele group compared to the control group. It was determined that there was adifference among groups in terms of TNF-α and p53 expression levels which obtainedby Real Time PCR. Jervin has an effect decreasing number of abnormal sperms invaricocele and has effect regulating anti-inflammatory and antioxidant activity, but itwas determined that it has also an inhibitory effect on p53.Keywords: Jervin, p53, Testes, TNF-α, Varicocele