Çocukluk çağı akut lenfoblastik lösemili hastaların ve sağlıklı vericilerin kemik iliklerinden elde edilen mezenkimal kök hücrelerin lösemik blastlar üzerindeki etkilerinin karşılaştırılması

Abstract

Akut lenfoblastik lösemi çocukluk çağında en sık görülen kanserdir. Kür oranı yüksek olmasına rağmen, çocuklarda önde gelen ölüm sebeplerinden biridir. Kemik iliği mikroçevresi lösemi başlangıcında ve sürecinde önemli rol oynar. Mikroçevreyi oluşturan hücreler, özellikle mezenkimal kök hücreler (MKH), büyüme faktörleri, sitokinler ve hücre içi sinyallar üreterek ALL hücrenin sağkalımını, çoğalmasını ve ilaç direnci göstermesini düzenler. MKH'lerin lösemik hücre sağkalımına etkisi tam olarak bilinmemekle beraber salgılanan çeşitli sitokinler ya da blastlarla etkileşiminin etkisinin olduğu düşünülmektedir. Çalışmamızda ALL'li ve sağlıklı bireylerin MKH'lerinin blastik hücreler üzerindeki apoptotik etkisi in vitro da hücre-hücre kontağı olmadan (membranlı) ve hücre-hücre kontağı sağlanarak (membransız) yapılan kokültür deneyleriyle incelenmiş ve blastik hücrelerin apoptotik özellikleri flow sitometri yöntemiyle analiz edilmiştir. Ayrıca MKH'ler de β-katenin proteinin ve apoptotik proteinler olan Bax, Bcl-2 ve Kaspaz 3'ün ekspresyon çalışmaları immunositokimyasal olarak belirlenmiştir.Kokültür sonuçlarımıza göre hasta ve sağlıklı MKH'lerin blastlarla etkileşiminde apoptotik anlamda bir fark olmadığı ancak membranlı ve membransız olarak kokültüre edilen blast hücrelerinin apoptoz oranlarının değiştiği saptandı. MKH'lerde incelenen β-katenin, Bax, Bcl-2 ve Kaspaz 3 ekspresyonunun hasta-sağlıklı gruplarda ve membranlı–membransız gruplarda değiştiği görüldü. Anahtar Kelimeler: Apoptoz, çocukluk çağı akut lenfoblastik lösemi, mezenkimal kök hücre, β-katenin

Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most common malignancy in childhood. Despite the high rate of cure, ALL is one of the leading causes of death in children. The bone marrow microenvironment plays an important role in the initiation and progression of leukemia. Various components of this microenvironment, particularly MSCs, regulate ALL survival, proliferation, and drug resistance by producing growth factors, cytokines, and intracellular signals. The exact role of MSCs in leukemic cell survival is not well known, but probably they show their effects through secreting various cytokines or interact with the leukemic cells. In our study, the apoptotic effects of MSCs of patients with childhood ALL and healthy donors on blastic cells were investigated in vitro by coculturing without cell-cell contact (with membrane) and providing cell-cell contact (without membrane). Apoptotic properties of blasts were analyzed by flow cytometry. The expression studies of β-catenin and Bax, Bcl-2 and Caspase 3 which are apoptotic proteins were determined as immunocytochemical methods in MSCs.According to the result of coculture studies, when apoptotic rates of healthy-patients and with membrane, without membrane gorups were compared, it was found out that there is no difference in the MSCs interaction with blasts of healthy donors and patients whereas it was seen that apoptosis rates of the blastic cells which were cocultured with and without membrane changed. In addition, it was noticed that β-catenin, Bcl-2, Bax and Caspase 3 expression of MSCs showed changes in patients and healthy donors as well.Keywords: Apoptosis, childhood acute lymphoblastic leukemia, mesenchymal stem cell, β-catenin