Akciğer kanserli hastalarda kanda dolaşan tümör hücrelerinin akım sitometrisi ile tespiti

Abstract

Dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC'ler) karsinomların metastatik yayılımında önemli role sahiptir. Bu nedenle, son yıllarda birçok kanser türünde hastalığın seyri ve tedavi etkinliğini anlaşılmasında yardımcı olabileceği düşünülen CTC'ler üzerine yoğunlaşılmıştır. Teknik yaklaşımlardaki gelişmeler ile özellikle akciğer kanseri gibi dokularına ulaşılması zor olan tümörlerde sıvı biyopsi olarak tüm kandan CTC tespitinin değeri her geçen gün artmaktadır. Tanı anında sıklıkla metastaz yaptıkları teşhis edilen akciğer kanseri, hem kadınlarda hem de erkeklerde kanser ölüm nedenlerinin birincil sebebidir.Çalışmamızın amacı modifiye ettiğimiz metot ile akciğer kanserli hastaların periferik kan örneklerinde (7.5 mL) CTC tespitidir. CTC sayısının tespit edilmesi için 9 akciğer kanserli birey ve 9 sağlıklı birey çalışmaya dahil edilmiştir. Uyguladığımız metotta CTC zenginleştirilmesi için fikol yoğunluk gradiyent ayrımı ve manyetik mikro-boncuklar yardımı ile CD45 negatif seçilim gerçekleştirilmiştir. Son olarak, CTC'ler epitelyal adezyon molekülü (EpCAM) ve sitokeratin (CK 7,8,14,15,16,19) ekspresyolarının hedef alınması ile çoklu parametreli olarak akım sitometrisi ile analiz edilmiştir. Çalışmamız sonucunda akciğer kanserli hastaların tümünde CTC gözlenirken, sağlıklı bireylerde gözlenmemiştir (Z=3.823; p<0.001). Böylece, modifiye ettiğimiz metodun akciğer kanserinde CTC tespitinde kullanılabilirliği gösterilmiştir.

Circulating tumor cells (CTCs) play a crucial role in the metastatic spread of carcinoma. Therefore, CTC has been interest of a subject in the past few decades in terms of prognosis and response to the therapy in several cancer diseases. Recent improvements in technical approaches maintain to identify CTCs from whole blood have demonstrated the potential value of CTC detection as a liquid biopsy especially in those tumors where tissue accessibility is often challenging as in lung cancer. Lung cancer is the most common cause of death from cancer worldwide in both men and women which is commonly metastasize before it is diagnosed. The aim of this study is to determine of CTCs in peripheral blood sample (7.5 mL) of lung cancer patients by the modified method. This method enrolled on 9 patients with lung cancer and 9 healthy volunteers which consists of a ficoll density gradient centrifugation and a magnetic microbead separation technique by CD45 negative selection method enrichment step. Finally, we determined CTCs through the expression of anti-epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) and cytokeratins (CK7,8,14,15,16,19) by multi-parameter flow cytometry. Consequently, we can indicate that, CTCs were detected in all of patients but no CTCs were evaluated on healthy volunteers (Z=3.823; p<0.001). Thus, CTCs were detectable in peripheral blood sample of lung cancer patients using with our method.