Glutatyon S-transferaz (GST) enziminin japon bıldırcın (Coturnix coturnix japonica) karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) enzimi bıldırcın karaciğerindenamonyum sülfat çöktürmesi ve glutatyon-agaroz afinite kromatografisi kullanılarak 15,86EÜ/mg protein spesifik aktivite ile %12,36 verimle 46,1 kat saflaştırıldı. Enzim saflığınıkontrol etmek ve alt birim molekül kütlelerini belirlemek amacıyla SDS-PAGE yapıldı vetek bant elde edildi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılan GST enziminin alt birimmolekül kütlesi yaklaşık olarak 25,1 kDa belirlendi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılanGST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında; optimum pH, Tris-HCI tamponupH=8,5, optimum iyonik şiddet, Tris-HCI tamponu 1,4 M, stabil pH, Tris-HCI tamponupH = 8,5 ve optimum sıcaklık 55oC olarak bulundu. Saf enzime ait KM ve Vmax değerleriLineweaver-Burk grafiklerinden faydalanılarak GSH substratı için KM, 0,114 mM, Vmax0,672 EÜ/mL; CDNB substratı için KM, 0,048 mM, Vmax, 0,047 EÜ/ mL olarakhesaplandı.Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferaz, bıldırcın karaciğeri, saflaştırma,karakterizasyon.

In the present study, glutathione S-transferase enzyme (GST; EC 2.5.1.18) was purifiedfrom quail (Coturnix, coturnix japonica) liver with 15.86 EU/mg specific activity, in ayield of 12.36%, 46.1 purification fold, by ammonium sulfate precipitation andglutathione agarose affinity chromatography. SDS-PAGE was performed to controlenzyme purity and to determine subunit molecular masses and single band was obtained.The subunit molecular mass of the GST enzyme purified from the quail liver wasdetermined as approximately 25.1 kDa. Quail liver GST enzyme characterization studiescarried out; optimum pH, Tris-HCl buffer pH = 8.5, optimum ionic strength, Tris-HClbuffer 1.4 M, stable pH, Tris-HCl buffer pH = 8.5 and optimum temperature was foundas 55 oC. KM and Vmax values of pure enzyme were obtained from Lineweaver-Burkgraphs. For the GSH substrate, KM 0.114 mM, Vmax 0.672 EU / mL, for CDNB substrate,KM 0.048 mM, Vmax 0.047 EU / mL was calculated respectively.Keywords: Glutathione S-Transferase, Enzyme, Purification, Caracterization, Metal,Inhibition, Quail, Liver